酪氨酸代謝酶HPD在肺癌發(fā)生和發(fā)展中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、本論文的研究內(nèi)容分為兩部分，第一部分對酪氨酸代謝酶HPD（羥苯丙酮酸二加氧酶）在肺癌發(fā)生和發(fā)展中的作用及作用機(jī)制進(jìn)行了系統(tǒng)研究，第二部分在前期研究基礎(chǔ)上，深入探討了轉(zhuǎn)錄因子THAP11在造血分化中的作用機(jī)制。
　　HPD是酪氨酸代謝中的一個(gè)關(guān)鍵酶，以往的研究表明HPD在肝臟及腎臟中特異表達(dá)，在其他組織中表達(dá)水平低或不表達(dá)。利用組織芯片檢測了HPD在355例肺癌病人中的表達(dá)水平，結(jié)果顯示HPD在肺癌組織中的表達(dá)水平顯著高于癌旁組織，

2、進(jìn)一步利用ELISA和Western Blotting技術(shù)驗(yàn)證了HPD在肺癌組織和細(xì)胞系的高表達(dá)。為探討HPD異常高表達(dá)對肺癌細(xì)胞惡性表型的影響，構(gòu)建了基于慢病毒的HPD過表達(dá)及HPD RNAi的肺癌穩(wěn)定細(xì)胞株，研究發(fā)現(xiàn)過表達(dá)HPD并不影響肺癌細(xì)胞的生長，但敲低HPD則顯著抑制肺癌細(xì)胞的生長與存活，并降低肺癌細(xì)胞體內(nèi)成瘤能力，表明HPD參與肺癌細(xì)胞生長和存活能力的調(diào)控。此外，過表達(dá)HPD促進(jìn)多種肺癌細(xì)胞的遷移能力，敲低HPD則抑制肺癌細(xì)

3、胞的遷移能力，并降低肺癌細(xì)胞在體內(nèi)的轉(zhuǎn)移能力，表明HPD過表達(dá)促進(jìn)肺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移。還檢測了HPD對治療肺癌藥物敏感性的影響，結(jié)果顯示過表達(dá)HPD降低肺癌細(xì)胞對多種藥物的敏感性，而敲低HPD可導(dǎo)致肺癌細(xì)胞對藥物的敏感性增加，凋亡增多。另外，對HPD的作用機(jī)制進(jìn)行初步探討，發(fā)現(xiàn)HPD的酶活性特異抑制劑Nitisinone對肺癌細(xì)胞增殖和遷移無明顯影響，提示HPD對肺癌細(xì)胞的影響并不依賴其代謝酶活性。根據(jù)前期研究基礎(chǔ)，發(fā)現(xiàn)HPD促進(jìn)肺癌細(xì)胞

4、中NF-?B信號通路的活化，表現(xiàn)為HPD增加NF-кB報(bào)告基因活性，促進(jìn)IкBα降解及p65入核，上調(diào)NF-кB下游靶基因如c-Myc、MMP9和CyclinD1等的表達(dá)，表明HPD可能通過促進(jìn)NF-кB信號通路調(diào)控肺癌細(xì)胞存活、凋亡和遷移。
　　THAP11是一種轉(zhuǎn)錄因子，可通過結(jié)合c-Myc啟動(dòng)子下調(diào)c-Myc表達(dá)抑制細(xì)胞增殖，在增殖、胚胎發(fā)育及ES細(xì)胞分化過程中發(fā)揮重要作用。前期的研究表明THAP11是一個(gè)新的調(diào)控紅系/巨核

5、系分化的轉(zhuǎn)錄因子，在調(diào)控造血細(xì)胞向紅系和巨核系分化過程中發(fā)揮著重要的作用，但調(diào)控機(jī)制并不明確。對THAP11在造血分化中的作用機(jī)制進(jìn)行深入研究，結(jié)果顯示在hemin誘導(dǎo)K562細(xì)胞向紅系分化過程中，THAP11過表達(dá)可導(dǎo)致紅系造血因子c-Myc下調(diào)，巨核系造血因子Fli1上調(diào)。THAP11在多種造血轉(zhuǎn)錄因子如GATA-2、c-Myb、Fli-1和c-Myc等的啟動(dòng)子區(qū)存在結(jié)合位點(diǎn)，ChIP實(shí)驗(yàn)證實(shí)THAP11與這些位點(diǎn)存在結(jié)合。在PMA