MMPs在兔腹主動脈AS斑塊內(nèi)血管新生中的作用及通絡(luò)干預(yù)的研究.pdf

1、本文主要從以下幾方面進(jìn)行了論述:
　　論文Ⅰ 基質(zhì)金屬蛋白酶在兔腹主動脈動脈粥樣硬化斑塊內(nèi)血管新生及斑塊穩(wěn)定性中的作用
　　動脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)中不穩(wěn)定斑塊破裂從而引發(fā)血栓的形成逐漸成為急性心血管事件的首要病因。因此，穩(wěn)定易損斑塊具有極為重要的臨床意義。病理學(xué)研究結(jié)果表明，不穩(wěn)定、易破裂的動脈粥樣硬化斑塊具有如下特征:持續(xù)性的炎癥反應(yīng)，基質(zhì)降解，以及細(xì)胞死亡。這些改變最終導(dǎo)致纖維帽變薄，炎癥增

2、多，壞死核心增大。斑塊內(nèi)新生血管是動脈粥樣硬化斑塊的另一重要特征。
　　越來越多的研究結(jié)果表明，在血管新生過程中，基質(zhì)金屬蛋白酶不僅參與降解細(xì)胞外基質(zhì)，亦可通過多種其他途徑調(diào)節(jié)該過程。MMP-1、-2、-3、-9可促進(jìn)血管新生，部分MMPs也可抑制血管新生。然而，MMPs在AS進(jìn)展期斑塊內(nèi)血管新生中的主要作用仍不明確，有待進(jìn)一步研究。
　　目的:
　　1.建立與人類AS病變特征類似的動物模型，觀察兔動脈粥樣硬化斑塊進(jìn)展

3、期各MMPs表達(dá)的變化趨勢;
　　2.闡明各MMPs在AS進(jìn)展期對斑塊內(nèi)血管新生及其易損性的影響及可能的作用機(jī)制。
　　方法:
　　1.建立動物模型
　　純種新西蘭雄性大白兔（體重1.7-2.1kg）27只給予球囊拉傷術(shù)損傷腹主動脈后，高脂飼料（1％膽固醇）喂養(yǎng)。分別在術(shù)后4、6、8、10和12周末隨機(jī)選取5只實(shí)驗(yàn)兔給予安樂死。
　　2.血液生化指標(biāo)的檢測
　　各實(shí)驗(yàn)兔分別于4、6、8、10和12周末

4、處死前留取自凝血，用作生化指標(biāo)的測定。禁食12h，稱取體重后，經(jīng)其耳緣靜脈留取自凝血，采用酶法檢測血清中甘油三酯(triglyceride，TG)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）以及總膽固醇(total cholesterol，TC)的濃度。
　　3.AS易損斑塊

5、的影像學(xué)特征檢查
　　于4、6、8、10和12周末處死動物前應(yīng)用血管內(nèi)超聲(IVUS)測量血管外膜彈力膜面積(the external elastic membrane area，EEMA)、管腔面積(lumen area，LA)、斑塊面積(plaque area，PA)及斑塊負(fù)荷(the percentage of plaque burden，PB)等指標(biāo)。
　　結(jié)果:
　　1.實(shí)驗(yàn)動物基本情況
　　所有實(shí)驗(yàn)兔

6、在球囊損傷后均恢復(fù)良好，無并發(fā)癥出現(xiàn):實(shí)驗(yàn)后期個別實(shí)驗(yàn)兔狀態(tài)較差，分別于術(shù)后6周及10周各有1只實(shí)驗(yàn)兔死于腹瀉。
　　2.實(shí)驗(yàn)動物體重的變化
　　隨著實(shí)驗(yàn)進(jìn)展，所有實(shí)驗(yàn)兔體重均逐步增加，各時間點(diǎn)與上一時間點(diǎn)相比均有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05）。
　　3.血液生化指標(biāo)的檢測
　　隨著實(shí)驗(yàn)進(jìn)展，實(shí)驗(yàn)兔血脂各項指標(biāo)均逐漸升高。8周組、10周組及12周組中TC、HDL-C和LDL-C與6周組相比均有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05

7、)，TG則在12周組與6周組相比達(dá)到統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.在AS進(jìn)展期，斑塊內(nèi)MMP-1、-2、-3及-9含量逐漸升高，MMP-14含量逐漸降低;VEGF-A含量逐漸升高;斑塊內(nèi)微血管密度逐漸升高;斑塊易損性逐漸增加。
　　2.在AS進(jìn)展期，斑塊內(nèi)MMP-1、-2、-3、-9上調(diào)和MMP-14下調(diào)與斑塊中微血管密度、斑塊易損性及VEGF-A密切相關(guān)，說明在AS進(jìn)展期，MMP-1、-2、-3、

8、-9可能通過上調(diào)VEGF-A的表達(dá)促進(jìn)斑塊內(nèi)血管新生，進(jìn)而導(dǎo)致斑塊不穩(wěn)定。
　　論文Ⅱ 通心絡(luò)對動脈粥樣硬化中斑塊內(nèi)血管新生及斑塊穩(wěn)定性的影響
　　急性心血管事件正在嚴(yán)重威脅人類的健康，其死亡率呈逐年上升趨勢，動脈粥樣硬化是急性心血管事件的病理學(xué)基礎(chǔ)，不穩(wěn)定斑塊發(fā)破裂從而引發(fā)血栓形成日漸成為急性心血管事件的首要病因。AS是一個由多種因素共同參與的病理過程，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜。近年來，因AS的發(fā)病廣泛且終點(diǎn)事件嚴(yán)重，本病已受到越來

9、越廣泛的關(guān)注，及早防治勢在必行。然而已患病或其他因素引起的AS病人仍普遍存在，且對AS的治療仍然缺乏有效的措施，故針對其發(fā)病機(jī)制，應(yīng)用有效而合理的藥物，防止已形成的斑塊發(fā)展為易損斑塊，是預(yù)防由AS斑塊破裂引起的急性心血管事件的根本原則。
　　基于以上研究，本課題提出假說:通心絡(luò)可影響AS斑塊內(nèi)血管新生;通心絡(luò)可能通過影響LRP1的表達(dá)進(jìn)而影響MMP-2及-9的表達(dá)，抑制斑塊內(nèi)新生血管的形成，從而增加斑塊穩(wěn)定性。
　　目的:<

10、br>　　1.研究通心絡(luò)在兔腹主動脈AS中對斑塊內(nèi)血管新生及斑塊易損性的影響;
　　2.闡明通心絡(luò)促使斑塊穩(wěn)定可能的作用機(jī)制。
　　方法:
　　1.建立動物模型
　　3月齡純種健康雄性新西蘭大白兔(體重1.7-2.1kg)120只，適應(yīng)性喂養(yǎng)2周，給予球囊拉傷術(shù)損傷腹主動脈后，高脂飼料（1％膽固醇）喂養(yǎng)12周。所有動物實(shí)驗(yàn)均嚴(yán)格遵守山東大學(xué)齊魯醫(yī)院倫理委員會對動物實(shí)驗(yàn)的規(guī)定和要求。
　　2.動物分組及藥物干

11、預(yù)
　　成功建立動物模型后隨機(jī)將動物分為對照組，小、中、大劑量通心絡(luò)組，阿托伐他汀組以及聯(lián)合用藥組:
　　A組（對照組）:20只，成功建立動物模型后，給予普通飼料喂養(yǎng)12周;
　　B組（小劑量通心絡(luò)組）:20只，成功建立動物模型后，普通飼料+小劑量通心絡(luò)(0.15g/kg/d)喂養(yǎng)12周;
　　C組（中劑量通心絡(luò)組）:20只，成功建立動物模型后，普通飼料+中劑量通心絡(luò)(0.3g/kg/d)喂養(yǎng)12周;
　　

12、D組（大劑量通心絡(luò)組）:20只，成功建立動物模型后，普通飼料+大劑量通心絡(luò)(0.6g/kg/d)喂養(yǎng)12周;
　　E組（阿托伐他汀組）:20只，成功建立動物模型后，普通飼料+大劑量阿托伐他汀(5mg/kg/d)喂養(yǎng)12周;
　　F組（聯(lián)合用藥組）:20只，成功建立動物模型后，普通飼料+大劑量通心絡(luò)(0.6g/kg/a)+阿托伐他汀(5mg/kg/d)喂養(yǎng)12周。
　　3.血液生化指標(biāo)的檢測
　　各實(shí)驗(yàn)兔均處死前留

13、取自凝血，用作血液生化指標(biāo)的檢測。禁食12h左右，稱取體重后，經(jīng)其耳緣靜脈留取自凝血，采用酶法檢測血清中甘油三酯(triglyceride，TG)、低密度脂蛋白（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C)以及總膽固醇(totalcholesterol，TC)的濃度。
　　結(jié)果:
　　

14、1.實(shí)驗(yàn)動物基本情況
　　所有實(shí)驗(yàn)兔在球囊損傷后均恢復(fù)良好，無并發(fā)癥出現(xiàn);進(jìn)入藥物干預(yù)階段的實(shí)驗(yàn)兔中，中、大劑量通心絡(luò)組各死亡2只，對照組、小劑量通心絡(luò)組、阿托伐他汀組及聯(lián)合用藥組各死亡1只，死亡原因分別為呼吸道感染或腹瀉。24周末時各組實(shí)驗(yàn)動物存活情況如下:A組（對照組）19只，B組（通心絡(luò)小劑量組）19只，C組（通心絡(luò)中劑量組）18只，D組（通心絡(luò)大劑量組）18只，E組（阿托伐他汀組）19只，F(xiàn)組（聯(lián)合用藥組）19只。

15、　　2.實(shí)驗(yàn)動物體重的變化
　　24周末，所有實(shí)驗(yàn)兔體重較實(shí)驗(yàn)開始前均有所增加，但各組之間相比無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05）。
　　3.血液生化指標(biāo)的檢測
　　24周末，與A組相比，其余各組血脂TC、TG及LDL-C含量均有所下降，HDL-C含量則均有所升高:
　　與對照組相比，各藥物治療組血清TC含量均顯著降低(P＜0.01)，聯(lián)合用藥組TC含量降低最為顯著(P＜0.01)，阿托伐他汀組TC含量較通心絡(luò)各組明顯降

16、低(P＜0.01），通心絡(luò)各組隨劑量增大降TC效果明顯增強(qiáng)(P＜0.01）;
　　與對照組相比，各藥物治療組血清TG含量均有明顯下調(diào)(P＜0.01），聯(lián)合用藥組TG含量下調(diào)較為顯著(P＜0.01）;大劑量通心絡(luò)組與中劑量通心絡(luò)及阿托伐他汀組TG含量相比均無顯著性差異(P＞0.05)，與小劑量通心絡(luò)組相比則TG含量顯著降低(P＜0.01）;
　　與對照組相比，各藥物治療組血清LDL-C含量均有所下調(diào)（P＜0.01），聯(lián)合用藥組

17、及阿托伐他汀組LDL-C含量降低較為顯著(P＜0.01），二組之間相比LDL-C含量無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）;通心絡(luò)大劑量組LDL-C水平與通心絡(luò)小劑量組相比顯著降低(P＜0.01），與中劑量通心絡(luò)組相比無明顯差異(P＞0.05）;
　　與對照組相比，各藥物治療組血清HDL-C含量均有所升高，大劑量通心絡(luò)組HDL-C水平明顯高于中、小劑量通心絡(luò)組（P＜0.05），與阿托伐他汀組相比無顯著差異(P＞0.05）;聯(lián)合用藥組HDL-