WASp缺陷對(duì)濾泡輔助T細(xì)胞功能的影響.pdf

1、第一部分：Wiskott-Aldrich綜合征患兒濾泡輔助T細(xì)胞的數(shù)量和功能研究
　　目的：通過(guò)檢測(cè)Wiskott-Aldrich綜合征（WAS）患兒外周血濾泡輔助T細(xì)胞（Tfh）的數(shù)量及功能，探討Tfh在Wiskott-Aldrich綜合征的發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　方法：收集35例WAS患兒及35例同齡健康兒童外周血，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)WAS患兒及健康同齡兒童外周血Tfh細(xì)胞百分比，Tfh亞群變化，及分泌細(xì)胞因子IL21的Tf

2、h百分比；流式分選WAS患兒及健康同齡兒童外周血CD4+T細(xì)胞，qPCR檢測(cè)WAS患兒及健康同齡兒童CD4+T細(xì)胞中 Tfh分化發(fā)育關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子 Bcl6和抑制分子 Blimp-1 mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果：WAS患兒外周血Tfh細(xì)胞百分比較健康對(duì)照顯著下降（HC：7.0±0.6％；WAS：3.9±0.4%；P<0.0001），且隨 WAS患兒年齡的增加外周血Tfh下降更加顯著。WAS患兒外周血記憶Tfh較健康對(duì)照在各年齡均顯著降

3、低（ HC：21.0±1.4%；WAS：10.1±1.1%；P<0.0001）。WAS患兒外周血Th1樣Tfh百分比顯著低于健康對(duì)照（HC:37.8±1.6%；WAS32.3±1.9%；P=0.02），Th2樣和Th17樣Tfh百分比與健康對(duì)照無(wú)差異，但WAS患兒外周血Th2樣+Th17樣Tfh/Th1樣Tfh比例顯著高于健康對(duì)照（HC:1.5±0.1%；WAS2.1±0.2%；P=0.02）。WAS患兒外周血 ICOS+細(xì)胞占 Tfh

4、細(xì)胞百分比較健康對(duì)照顯著升高（未刺激：HC:3.8±0.3%；WAS7.1±0.8%；P=0.001；PHA刺激：HC:19±2.8%；WAS28.6±2.6%；P=0.02）。WAS患兒外周血IL21+細(xì)胞占Tfh細(xì)胞百分比與健康對(duì)照無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。WAS患兒CD4+T細(xì)胞Bcl6表達(dá)較健康對(duì)照顯著降低（HC:1.7±0.3%；WAS0.5±0.1%；P=0.02），Blimp-1表達(dá)與健康對(duì)照比較無(wú)顯著差異。
　　結(jié)論：WA

5、S患兒外周血Tfh數(shù)量較健康同齡對(duì)照顯著下降，可能是因?yàn)閃AS患兒外周血CD4+T細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄因子Bcl6表達(dá)下降，此結(jié)果部分闡明了 WAS綜合征免疫缺陷的發(fā)病機(jī)制。WAS患兒外周血Tfh亞群偏移，ICOS表達(dá)升高，可能是WAS患兒易發(fā)生自身免疫性疾病的原因之一。
　　第二部分：WAS基因敲除小鼠濾泡輔助T細(xì)胞免疫記憶應(yīng)答的研究
　　目的：通過(guò)檢測(cè)未免疫及二次免疫后WAS基因缺陷小鼠Tfh的變化，探討WASp缺陷對(duì)Tfh免疫

6、記憶反應(yīng)的影響。
　　方法：同窩內(nèi)選取WASp缺陷小鼠6只，WT小鼠6只，每種各取3只一組，分為生理鹽水組和免疫組。生理鹽水組在d0天和d30天腹腔注射N(xiāo)S400μL；免疫組在d0天和d30天腹腔注射N(xiāo)P-KLH400μg。兩組均在 d35天心臟取血及處死取脾臟制成細(xì)胞懸液。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血及脾臟細(xì)胞Tfh比例。
　　結(jié)果：生理鹽水組， WASp缺陷小鼠外周血及脾臟細(xì)胞CD4+CD44hiCXCR5+T細(xì)胞百分比與WT小

7、鼠無(wú)顯著差異。然而，WASp缺陷小鼠外周血及脾臟細(xì)胞CD4+CXCR5+ICOS+T細(xì)胞百分比（Blood, WT:2.3±0.3%；WAS4.2±0.2%；P=0.01; Spleen, WT:4.1±0.9%；WAS8.0±0.3%；P=0.02）及 CD4+CXCR5+ PD-1+ T細(xì)胞百分比（ Blood, WT:2.3±0.6%；WAS5±0.3%；P=0.02; Spleen, WT:4.3±0.5%；WAS8.6±0.3

8、%；P=0.002）較WT小鼠均顯著升高。免疫組，WASp缺陷小鼠外周血及脾臟細(xì)胞 CD4+CD44hiCXCR5+ T細(xì)胞百分比均顯著低于WT小鼠（ Blood, WT:4.9±0.1%；WAS3.1±0.1%；P=0.001; Spleen, WT:6.7±0.3%； WAS8.4±0.1%； P=0.008），且脾臟細(xì)胞CD4+CXCR5+Bcl6+T細(xì)胞也顯著下降（WT:6.8±0.5%；WAS4.6±0.5%；P=0.04）。

9、與生理鹽水組一致的是，WASp缺陷小鼠外周血及脾臟細(xì)胞CD4+CXCR5+ ICOS+ T細(xì)胞百分比（ Blood, WT:5.8±0.4%；WAS3.2±0.5%；P=0.02;Spleen, WT:13.8±0.2%；WAS16.7±0.5%；P=0.007）及 CD4+CXCR5+ PD-1+ T細(xì)胞百分比（Blood, WT:3.9±0.5%；WAS6.5±0.7%；P=0.04;Spleen, WT:14.2±0.5%；WAS