濾泡輔助性T細(xì)胞在慢性HBV感染中的初步研究.pdf

1、背景：
　　HBV(Hepatitis B virus，HBV)的感染是一個(gè)波及全球的公共衛(wèi)生問(wèn)題，是造成肝臟急慢性損傷的主要原因。在我國(guó)，隨著疫苗接種等預(yù)防措施的普及，HBV感染人群較前已有明顯減少，但是人群的HBsAg陽(yáng)性率仍達(dá)7.18％。許多研究表明，HBV引起肝臟損害的原因主要是病毒所觸發(fā)的機(jī)體免疫應(yīng)答所造成，機(jī)體的CD8+T淋巴細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞、自然殺傷性細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞都參與疾病其中，交互成為網(wǎng)絡(luò)，

2、影響疾病的發(fā)展過(guò)程。在這個(gè)免疫網(wǎng)絡(luò)中，濾泡輔助性T淋巴細(xì)胞(T follicular helper cells，Tfh)所發(fā)揮的作用在近年來(lái)引起了廣泛的關(guān)注。濾泡輔助性T淋巴細(xì)胞主要存在于生發(fā)中心（germinal center，GC）中，在外周血循環(huán)系統(tǒng)中也有分布。Tfh細(xì)胞的主要作用是輔助B細(xì)胞增殖和發(fā)育，形成漿細(xì)胞或者是記憶B細(xì)胞，并進(jìn)一步的輔助B細(xì)胞完成抗體分泌和型別轉(zhuǎn)換。研究Tfh細(xì)胞在HBV感染后慢性乙型肝炎中發(fā)揮的作用，對(duì)

3、于了解抗HBV特異性體液免疫機(jī)制具有重要意義。
　　目的：
　　通過(guò)檢測(cè)慢性HBV感染者外周血中的Tfh細(xì)胞的頻數(shù)、相關(guān)功能分子和細(xì)胞因子的基因的表達(dá)情況。初步了解在慢性HBV感染過(guò)程中Tfh細(xì)胞所發(fā)揮的作用。
　　方法：
　　1、研究對(duì)象選擇:選擇兩年內(nèi)未進(jìn)行抗病毒治療的慢性HBV感染的患者，通過(guò)患者AST、ALT和HBV-DNA臨床指標(biāo)的區(qū)別將其分為免疫耐受組和免疫激活組。選擇門(mén)診健康體檢者作為健康對(duì)照組。<

4、br>　　2、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)三組人群外周血中的Tfh細(xì)胞(CD3+CD4+CXCR5+T)和B細(xì)胞(CD19+)頻數(shù)，Tfh表面ICOS、PD1、CD40L分子的表達(dá)頻數(shù)和B細(xì)胞表面ICOSL、PDL1、CD40分子的表達(dá)頻數(shù)。
　　3、熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)慢性HBV感染者Tfh細(xì)胞的特異性功能分子CXCR5、Bcl6和細(xì)胞因子IL-4、IL-21的mRNA的表達(dá)情況。
　　4、統(tǒng)計(jì)分析:數(shù)據(jù)采用SPSS18.0軟件進(jìn)行整

5、理和分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示，多組差異比較采用單因素方差分析，兩組比較采用LSD-t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。采用Pearson檢驗(yàn)相關(guān)性分析，檢驗(yàn)慢性HBV感染者外周血中Tfh細(xì)胞與B細(xì)胞頻數(shù)的相關(guān)性和相關(guān)功能分子的表達(dá)頻數(shù)的相關(guān)性，檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)與臨床指標(biāo)的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　1、在外周血中，健康志愿者Tfh細(xì)胞頻數(shù)為(15.47±8.72)％，免疫耐受者的Tfh細(xì)胞頻數(shù)為(17.66

6、±9.29)％，免疫激活者的Tfh細(xì)胞頻數(shù)為(22.10±18.28)％。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析三組間沒(méi)有顯著差異。
　　2、慢性HBV感染者外周血Tfh細(xì)胞上ICOS、PD1、CD40L分子的表達(dá)頻數(shù)顯著高于健康對(duì)照者，其中免疫耐受者和免疫激活者之間無(wú)顯著差異;慢性HBV感染患者外周血B細(xì)胞上的ICOSL、PDL1、CD40分子的表達(dá)頻數(shù)與健康對(duì)照組無(wú)顯著差異。
　　3、慢性HBV感染者外周血的Tfh細(xì)胞的CXCR5、Bcl6、IL-

7、4、IL-21mRNA的表達(dá)顯著高于健康對(duì)照者。
　　4、慢性HBV感染者外周血的ICOS陽(yáng)性的Tfh細(xì)胞與ICOSL陽(yáng)性的B細(xì)胞頻數(shù)呈正相關(guān)，PD1陽(yáng)性的Tfh細(xì)胞與PDL1陽(yáng)性的B細(xì)胞頻數(shù)呈正相關(guān)。
　　5、慢性HBV感染者外周血中Tfh細(xì)胞的頻數(shù)與ALT、AST呈正相關(guān);CD40陽(yáng)性的B細(xì)胞的頻數(shù)與ALT，AST，HBV-DNA呈負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1、慢性HBV感染者的Tfh細(xì)胞的數(shù)量并未發(fā)生顯著改

8、變，可能病毒的感染是影響了Tfh細(xì)胞功能的異常而致免疫失衡。
　　2、慢性HBV感染者外周血中ICOS，PD1，CD40L在Tfh細(xì)胞上的表達(dá)頻數(shù)顯著高于健康對(duì)照組，可能是由于Tfh細(xì)胞與B細(xì)胞之間的相互作用的信號(hào)發(fā)生改變，導(dǎo)致了Tfh細(xì)胞輔助B細(xì)胞增殖和分化的作用的發(fā)生異常，外周循環(huán)中保護(hù)性抗體的分泌缺失，從而介導(dǎo)了HBV的持續(xù)感染。
　　3、慢性HBV感染者的Tfh細(xì)胞特異性功能分子Bcl6、CXCR5和細(xì)胞因子IL-4