耐輻射奇球菌PprM、PprI和PprA對(duì)酵母輻射抗性影響及三者相互作用初步研究.pdf

1、背景及目的：耐輻射奇球菌（Deinococcus radiodurans，DR）是迄今為止發(fā)現(xiàn)的輻射抗性最強(qiáng)的原核生物，是研究DNA損傷與修復(fù)的模式生物。研究耐輻射奇球菌特有基因表達(dá)的蛋白PprM、PprI和PprA對(duì)酵母細(xì)胞輻射抗性的影響及PprM與PprI和PprA的相互作用關(guān)系，探討PprM在DR中發(fā)揮耐輻射作用的分子機(jī)制，為研究DR輻射相關(guān)蛋白在真核生物中發(fā)揮輻射作用奠定基礎(chǔ)。
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　　1.構(gòu)建pGBKT

2、7-pprM、pGADT7-pprI和pGADT7-pprA載體，分別單轉(zhuǎn)入酵母Y187中，與野生型酵母Y187相比，不同劑量γ輻照后，計(jì)算其存活率，并做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；將 pGADT7-pprI和pGADT7-pprA載體，分別與pGBKT7-pprM共轉(zhuǎn)入酵母Y187菌株中，不同劑量γ輻照后，與PprI和PprA單表達(dá)酵母菌株相比，計(jì)算酵母Y187菌株的存活率，并做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　2.將pGADT7-pprI和pGADT7-pp

3、rA載體，分別與pGBKT7-pprM共轉(zhuǎn)入酵母Y187中，利用酵母雙雜交技術(shù)一對(duì)一分析PprM與PprI和PprA是否存在相互作用。
　　結(jié)果：
　　1.成功構(gòu)建pGBKT7-pprM、pGADT7-pprI和pGADT7-pprA載體，在未輻照時(shí)，PprM、PprI、PprA酵母表達(dá)菌株與酵母 Y187野生型菌株相比，其生存率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；在50-200Gy輻照下，PprM、PprI、PprA酵母表達(dá)菌株和與Y187野生

4、型菌株相比，其生存率有顯著差異；在100-200Gy輻照下，PprM-PprI酵母共表達(dá)菌株與PprI酵母表達(dá)菌株相比，其生存率有顯著差異；在100-200Gy輻照下，PprM-PprA酵母共表達(dá)菌株與PprA酵母表達(dá)菌株相比，其生存率有顯著差異。
　　2.經(jīng)過酵母雙雜一對(duì)一交驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，PprM與PprI和PprA共轉(zhuǎn)酵母Y187菌株,X-gal顯色反應(yīng)在8 h內(nèi)呈現(xiàn)藍(lán)色。
　　結(jié)論：
　　1.轉(zhuǎn)化耐輻射奇球菌pprM