酸模乙醇提取物對大鼠血壓和血管舒張功能的影響.pdf

1、目的：
　　酸模（Rumex acetosa L，RA）作為一種傳統(tǒng)植物中藥，具有清熱解毒、殺蟲、抗菌、抗病毒和抗氧化等生物活性。RA主要含蒽醌類化合物、黃酮類化合物、二苯乙烯類和鞣質(zhì)類化合物等成分。已證實(shí)，RA具有降低血壓的作用，但其機(jī)制目前尚不清楚。本研究旨在闡明酸模乙醇提取物（ethanol extract of Rumex acetosa L.，ERA）對大鼠血壓和血管舒張功能的影響及其機(jī)制。
　　方法：
　　

2、1．ERA對大鼠血壓和心率的影響
　　對大鼠進(jìn)行麻醉后，采用頸總動脈插管術(shù)和BL-420S生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，靜脈給不同濃度ERA（0.2、0.5、1.0mg/kg，60min）后，觀察大鼠血壓、心率與ERA之間的量效關(guān)系。
　　2．ERA對大鼠胸主動脈舒張功能的影響及機(jī)制
　　采用離體血管環(huán)實(shí)驗(yàn)裝置和BL-420S生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，觀察ERA對動脈環(huán)血管張力的影響。（1）觀察ERA對苯腎上腺素（PE,1μmol/L）預(yù)

3、收縮的內(nèi)皮完整及內(nèi)皮去除的胸主動脈環(huán)血管張力的影響。（2）利用各種阻滯劑預(yù)處理內(nèi)皮完整胸主動脈環(huán)后，探討ERA的擴(kuò)血管作用機(jī)制。
　　3．ERA對血管內(nèi)皮細(xì)胞中Akt和eNOS蛋白表達(dá)的影響
　　首先，采用MTT法觀察ERA對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）存活率的影響，并確定ERA促進(jìn)HUVECs生長的適宜濃度范圍。其次，采用Western blot法，觀察不同時間和不同濃度的ERA對血管內(nèi)皮細(xì)胞Akt和eNOS蛋白磷酸化

4、水平的影響；同時利用PI3-kinase/Akt抑制劑wortmannin和LY294002預(yù)處理HUVECs后觀察ERA對HUVECs中Akt和eNOS蛋白磷酸化水平的影響，從而探討PI3-kinase/Akt信號通路在ERA誘導(dǎo)的血管舒張中的作用。
　　結(jié)果：
　　1．ERA能顯著降低大鼠的血流動力學(xué)指標(biāo)，如收縮壓（systolic blood pressure,SBP）、舒張壓（diastolic blood pres

5、sure,DBP）、平均動脈壓（mean blood pressure,MBP）和心率（heart rate,HR）。ERA具有濃度依賴性的降低大鼠SBP、DBP、MBP和HR的作用。
　　2．在內(nèi)皮完整的胸主動脈環(huán)中，利用PE誘導(dǎo)其預(yù)收縮后累積加入不同濃度的ERA時，ERA呈現(xiàn)出劑量依賴性的舒張血管效應(yīng)。而此效應(yīng)內(nèi)皮去除后則消失。內(nèi)皮完整的血管環(huán)用一氧化氮合成酶（NOS）抑制劑L-NAME（10μmol/L）和可溶性鳥苷酸環(huán)化酶

6、（sGC）抑制劑ODQ（10μmol/L）前處理20分鐘后，發(fā)現(xiàn)ERA誘導(dǎo)的血管舒張作用明顯減弱。環(huán)氧合酶（COX）阻滯劑吲哚美辛（indomethacin,10μmol/L）前處理對ERA誘導(dǎo)的內(nèi)皮完整血管環(huán)的舒張作用無顯著影響。無鈣液、L-型鈣通道抑制劑地爾硫卓（diltiazem,10μmol/L）和鈣池操縱的鈣內(nèi)流（store-operated Ca2+entry,SOCE）調(diào)節(jié)劑即2-APB（75μmol/L）、Gd3+（10

7、μmol/L）和thapsigargin（1μmol/L）預(yù)處理可顯著抑制ERA誘導(dǎo)的內(nèi)皮完整血管環(huán)舒張作用。利用PI3-kinase/Akt信號通路抑制劑wortmannin（0.1μmol/L）和LY294002（30μmol/L）前處理后，發(fā)現(xiàn)ERA誘導(dǎo)的血管舒張作用顯著減弱。同時，內(nèi)向整流鉀通道（KIR）抑制劑BaCl2（100μmol/L）預(yù)處理可顯著減弱ERA誘導(dǎo)的血管舒張作用。而其它鉀通道抑制劑，如非選擇性鈣激活鉀通道（K

8、Ca）抑制劑四乙胺（TEA，1mmol/L）、ATP敏感性鉀通道（KATP）抑制劑glibenclamide（10μmol/L）、電壓依賴性鉀通道（Kv）抑制劑4-aminopyridine（4-AP，0.1μmol/L）、大電導(dǎo)鈣激活鉀通道（BKCa）抑制劑iberiotoxin（0.1μmol/L）、中電導(dǎo)鈣激活鉀通道（IKCa）抑制劑charybdotoxin（0.1μmol/L）和小電導(dǎo)鈣激活鉀通道（SKCa）抑制劑apamin

9、（0.3μmol/L）預(yù)處理均未能阻滯ERA誘導(dǎo)的內(nèi)皮完整血管環(huán)舒張作用。毒蕈堿受體抑制劑atropine（1μmol/L）和腎上腺素能受體抑制劑propranolol（1μmol/L）前處理對ERA誘導(dǎo)的血管舒張作用無顯著影響。
　　3．ERA促進(jìn)HUVECs生長的適宜濃度范圍為10-30μg/ml。ERA（30μg/ml）呈時間依賴性地增加HUVECs中Akt和eNOS磷酸化水平。此效應(yīng)早在用ERA預(yù)處理2min后開始，到5m

10、in時達(dá)到峰值。此外，ERA呈劑量依賴性地增加HUVECs中Akt和eNOS磷酸化水平（P<0.05）。當(dāng)HUVECs用ERA（30μg/ml）預(yù)處理5min時，Akt和eNOS磷酸化水平分別增加至2.67±0.03倍和3.65±0.05倍（P<0.01）。然而，用PI3-kinase/Akt信號通路抑制劑wortmannin（0.1μM）和LY294002（30μM）預(yù)處理內(nèi)皮細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)ERA的上述效應(yīng)明顯被減弱。
　　結(jié)論：<