人臍帶MSCs移植對不可逆性梗阻性腎損傷模型大鼠治療作用的研究.pdf

1、目的:從形態(tài)學及細胞免疫表型兩個方面評判組織塊貼壁法分離人臍帶MSCs的可行性及生化功能的完好性，從生化指標（血胱抑素C、血肌酐值水平）、腎組織切片HE染色以及腎組織中VEGF、CTGF兩項纖維化相關蛋白的表達水平三個不同角度研究人臍帶MSCs移植對不可逆性梗阻性腎損傷的治療和改善作用，為人臍帶MSCs在梗阻性腎病的臨床應用提供進一步的實驗和理論支撐。
　　方法:
　　1運用組織塊貼壁法分離新鮮臍帶的MSCs，在光鏡下觀察提

2、取的人臍帶MSCs的細胞形態(tài)，運用流式細胞檢測儀測定細胞的免疫表型。
　　2選取清潔級大鼠90只，隨機分成模型組（單側(cè)輸尿管梗阻組，n=30，大鼠行右側(cè)輸尿管結(jié)扎術，術后10天尾靜脈注射生理鹽水1ml），治療組（單側(cè)輸尿管梗阻+人臍帶MSCs移植組，n=30，大鼠行右側(cè)輸尿管結(jié)扎術，術后10天尾靜脈注射含1×107MSCs的生理鹽水1ml）和對照組（假手術組，n=30，分離右輸尿管但不結(jié)扎輸尿管，術后10天經(jīng)尾靜脈注生理鹽水1ml

3、）。三組大鼠分別于人臍帶MSCs移植后1周、2周、4周共3個時間點各取10只，抽血后處死取腎標本，行血胱抑素C水平、血肌酐值的測定，腎組織切片HE染色的觀察以及腎組織中VEGF、CTGF兩項纖維化相關分子在Western Blot檢測中的表達水平的研究。
　　3實驗所得數(shù)據(jù)用SPSS Statistics19軟件進行統(tǒng)計學處理，其中計量資料以均數(shù)±標準差（(x)±s）表示。檢驗標準為P=0.05。
　　結(jié)果:
　　1組

4、織塊貼壁法提取的人臍帶MSCs，在顯微鏡下可觀察到與成纖維細胞形態(tài)相似的細胞。流式細胞檢測示分離細胞表達CD90、CD73、CD105而不表達CD19、CD34、CD45、CD116及HLA-DR，其免疫表型符合人間充質(zhì)干細胞特征。
　　2在人臍帶MSCs移植后不同時間點，模型組和治療組大鼠同組間測得的血肌酐值和血胱抑素C水平均有顯著差異(P＜0.05)，而在同一時間點三組間的這兩項指標亦有明顯的差異(P＜0.05)。
　　

5、3在人臍帶MSCs移植后不同時間點，治療組與模型組的腎組織病理改變均表現(xiàn)為明顯的腎小管空泡樣擴張、炎性細胞浸潤和間質(zhì)纖維化改變。組織病理學評分方面，模型組在移植后早期相對較輕，而2W后則持續(xù)惡化(P＜0.05)。此外，治療組病理損傷嚴重程度明顯較同一時間點的模型組輕，但是在2W后也出現(xiàn)惡化趨勢(P＜0.05)。
　　4模型組VEGF蛋白表達水平隨時間進展呈先增加后減少趨勢，且在人臍帶MSCs移植后三個時間點的表達水平均較對照組強(

6、P＜0.05)，治療組在移植后1W時VEGF蛋白表達水平較對照組明顯增強，在2W時到達頂峰，之后再度出現(xiàn)下降且在4W時弱于同組1W時表達量(P＜0.05)。
　　5對照組CTGF蛋白表達水平最弱(P＜0.05)，模型組與治療組均在移植后1W時的表達量最高，往后隨時間進展呈遞減趨勢，至移植后4W達最低水平(P＜0.05)，但無論在移植后哪個時間點，治療組CTGF蛋白表達水平始終較模型組弱(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　

7、　1組織塊貼壁法提取人臍帶MSCs具有可行性，獲取的MSCs在傳代培養(yǎng)、分化和免疫等功能的發(fā)揮上也具有充分的優(yōu)勢。
　　2人臍帶MSCs移植能夠幫助改善不可逆性梗阻性腎損傷的腎功能，降低血肌酐值和血胱抑素C水平。血胱抑素C水平與血肌酐值水平均可作為評價梗阻性腎病病情發(fā)展及改善的指標，兩項指標變化趨勢基本一致，且血胱抑素C水平敏感性較血肌酐值更優(yōu)。
　　3人臍帶MSCs移植對于治療不可逆性梗阻性腎損傷有效，可以減輕管周間質(zhì)的炎

8、性浸潤，抑制腎小管上皮細胞凋亡以及幫助腎小管上皮細胞的修復，且在治療早期（移植后約2W內(nèi)）效果最佳，單次注射后明顯治療效果一般持續(xù)至2W左右，維持療效需多次注射。
　　4 VEGF、CTGF的表達水平與梗阻性腎病間質(zhì)纖維化進展程度具有相關性。其中，VEGF表達水平與纖維化程度負相關，CTGF表達水平與纖維化程度正相關。梗阻性腎損傷時，腎臟本身具有調(diào)節(jié)代償及自我修復作用，但始終無法阻止腎間質(zhì)纖維化的進程。人臍帶MSCs具有顯著的促腎