乙酰輔酶A羧化酶調(diào)控上皮性卵巢癌耐藥、增殖及轉(zhuǎn)移相關(guān)通路機(jī)制研究.pdf

1、研究目的：
　　通過(guò)慢病毒干擾卵巢上皮腫瘤細(xì)胞中ACC的表達(dá)，以及通過(guò)TOFA調(diào)節(jié)ACC的活性，觀察卵巢癌耐藥性、侵襲性的變化，同時(shí)檢測(cè)PI3K/Akt通路的表達(dá)水平，找出二者的關(guān)系，揭示卵巢上皮性腫瘤中ACC表達(dá)量/活性與腫瘤耐藥和侵襲的關(guān)系，為臨床開(kāi)發(fā)卵巢癌的治療藥物提供新的思路。
　　研究方法：
　　1．通過(guò)PCR及Westernblot技術(shù)驗(yàn)證ACC在A2780及A2780泰素耐藥株A2780T中的本底表達(dá)。<

2、br>　　2．通過(guò)生物信息學(xué)方法，檢索干擾ACC基因表達(dá)的最優(yōu)序列
　　3．構(gòu)建ACC真核表達(dá)質(zhì)粒，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染卵巢上皮癌細(xì)胞A2780，摸索最佳干擾序列。
　　4.化學(xué)合成載有ACC siRNA的慢病毒包裝，并導(dǎo)入A2780-Taxol細(xì)胞
　　5.應(yīng)用MTT和流式細(xì)胞術(shù)（FCM），分別檢測(cè)細(xì)胞在高表達(dá)ACC和不表達(dá)ACC兩種情況下的增殖、細(xì)胞周期差異
　　6.采用Western Blot方法檢測(cè)A2780T細(xì)胞

3、在TOFA處理下AAC、mTOR、Akt磷酸化及非磷酸化狀態(tài)的表達(dá),以及細(xì)胞在TOFA處理后與對(duì)照組的耐藥性差異。
　　研究結(jié)果：
　　1.在A2780及A2780泰素耐藥株中，檢測(cè)到ACC的表達(dá)量差異，A2780泰素耐藥株中ACC表達(dá)顯著高于A2780野生型。
　　2.構(gòu)建成功裝載有干擾ACC siRNA的慢病毒，并成功轉(zhuǎn)入A2780T細(xì)胞，建立了A2780T-siACC的新的低表達(dá)ACC的細(xì)胞株及其對(duì)照組。

4、　　3.研究驗(yàn)證了TOFA是通過(guò)通過(guò)磷酸化ACC導(dǎo)致其失活，從而導(dǎo)致細(xì)胞的耐藥性降低及細(xì)胞周期停滯。TOFA不直接引起細(xì)胞凋亡，而需要與化療藥物協(xié)同作用。
　　4.ACC表達(dá)的干擾可以引起A2780T細(xì)胞耐藥性的顯著降低。同時(shí)，通過(guò)TOFA磷酸化ACC導(dǎo)致其失活后，亦可以達(dá)到同樣的效果。
　　5.在TOFA處理的細(xì)胞中，通過(guò)westernblot檢測(cè)PI3K/Akt活通路性相關(guān)的p-mTOR及p-Akt表達(dá)均明顯下降，提示A

5、CC的磷酸化可能通過(guò)影響PI3K/Akt通路的活性從而影響細(xì)胞的耐藥性。
　　研究結(jié)論：
　　1.細(xì)胞內(nèi)ACC的表達(dá)缺失及活性的抑制均可以導(dǎo)致細(xì)胞周期停滯、細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥性的降低。
　　2.TOFA通過(guò)磷酸化ACC從而影響其活性。TOFA對(duì)細(xì)胞無(wú)直接殺傷作用，但可以協(xié)同化療藥物殺傷腫瘤細(xì)胞，對(duì)正常細(xì)胞沒(méi)有明顯影響，是一種潛在的卵巢癌的治療藥物
　　3.ACC可能是通過(guò)其磷酸化而影響PI3K/Akt通路的活性