丁苯酞對血管性癡呆大鼠認知功能的影響及Akt-Nrf2信號通路和NOX1蛋白的調節(jié)作用.pdf

1、目的：血管性認知功能障礙（vascularcognitiveimpairment，VCI）的晚期階段被稱作血管性癡呆（vasculardementia，VD）。隨著人口老齡化加劇、生活及醫(yī)療水平的提高，老年人比例逐漸增加，VD作為老年人群常見疾病給家庭、社會帶來了沉重的負擔。因此，更好的了解VD的發(fā)病機制，可以為臨床治療提供更好且有效的治療思路。
　　許多研究表明，慢性腦低灌注（chroniccerebralhypoperfusi

2、on，CCH）相關的氧化應激損傷在VCI的發(fā)病過程中起了重要的作用。而核轉錄相關因子2(Nuclearfactorerythroid2-relatedfactor2，Nrf2)-抗氧化反應元件（AntioxidantResponseElement，ARE）通路是體內非常重要的對抗氧化應激損傷的通路之一。本課題組擬通過雙側頸總動脈永久性結扎術（bilateralcommoncarotidarteryocclusion，BCCAO）制備VD

3、大鼠模型，觀察丁苯酞（dl-3n-butylphthalide，NBP）是否能改善VD大鼠的認知功能，并探討其作用機制是否與調節(jié)氧化應激相關蛋白NOX1表達及激活Akt/Nrf2信號轉導通路相關。
　　方法：
　　選取3月齡的雄性清潔級Sprague-Dawley(SD)大鼠為研究對象，體重約250-300g，隨機將其分為4組，即假手術組（sham組），模型組（vehicle組），NBP低劑量組（NBP-L），NBP高劑量組

4、（NBP-H）。采用BCCAO法制備VD大鼠模型，BCCAO術后次日開始進行干預。假手術組和模型組給予等體積玉米油；NBP低劑量組和NBP高劑量組分別給予40mg/kg和80mg/kg灌胃治療，連續(xù)干預28天。
　　4周后，采用Morris水迷宮進行行為學測試：定位航行實驗（placenavigationtest）測試大鼠的空間學習能力，空間探索實驗（spatialprobetest）測試大鼠的記憶能力。行為學測試結束后，應用HE

5、染色觀察各組大鼠海馬組織的病理學變化，采用Westernblot方法觀察t-akt、p-akt、t-Nrf2、n-Nrf2、HO-1、NOX-1、Bcl-2、Bax蛋白及免疫組化方法觀察HO-1蛋白的變化。
　　結果：
　　1、水迷宮行為學測試結果
　　1.1定位航行實驗：隨著訓練天數的增加，各組大鼠的尋臺時間，即逃避潛伏期逐漸縮短。與假手術組相比，VD模型組大鼠的逃避潛伏期明顯延長（P<0.01）。經丁苯酞干預后，N

6、BP治療組與模型組相比，大鼠的逃避潛伏期明顯縮短（P<0.01）。
　　1.2空間探索實驗：與假手術組相比較，VD模型組大鼠在目標象限停留時間百分比顯著下降（P<0.01）。經丁苯酞干預后，與模型組相比，治療組大鼠在目標象限停留時間百分比均有所升高（P<0.01）。
　　2、HE染色結果：
　　假手術組大鼠海馬CA1區(qū)的錐體神經元排列致密、整齊，無明顯的神經元丟失現象，神經元大小正常、形態(tài)結構完整，且核仁清晰，胞漿清亮

7、；與假手術相比，VD模型組神經元明顯的丟失，且神經元排列疏松紊亂、形態(tài)不規(guī)則，胞核濃染固縮；胞質呈嗜酸性。而經過丁苯酞干預后，上述形態(tài)學變化有所改善。大鼠海馬CA1區(qū)神經元缺失減少，但仍可見少量的核固縮。
　　3、WesternBlot結果
　　3.1丁苯酞對VD大鼠海馬Akt/Nrf2信號通路的作用
　　四組之間的t-akt蛋白表達水平沒有明顯統(tǒng)計學差異（P>0.05）；與假手術組相比，VD模型組大鼠海馬組織p-ak

8、t、totalNrf2、nuclearNrf2、HO-1蛋白表達明顯下降（P<0.01，P<0.01，P<0.01，P<0.01））；
　　而經丁苯酞治療后，與模型組相比，NBP-L和NBP-H組大鼠海馬p-akt蛋白水平均顯著升高（P<0.05，P<0.01）；治療組t-Nrf2、n-Nrf2蛋白水平均顯著升高（P<0.01，P<0.01）；NBP-L和NBP-H組的HO-1蛋白水平均表達增加（P<0.05，P<0.01）；但高

9、低劑量組之間沒有統(tǒng)計學差異（P>0.05）。
　　3.2丁苯酞對VD大鼠海馬NOX-1蛋白表達的影響
　　與假手術組相比，VD模型組大鼠海馬組織NOX1蛋白表達水平明顯升高（P<0.01）。經丁苯酞干預后，與模型組相比，NBP-L和NBP-H組大鼠海馬組織NOX1蛋白水平均表達下降（P<0.01，P<0.01），并且高劑量組NOX1蛋白下降更顯著（P<0.05）。
　　3.3丁苯酞對VD大鼠海馬Bcl-2、Bax蛋白表

10、達的影響
　　與假手術組相比，VD模型組大鼠海馬中Bcl-2蛋白顯著下降（P<0.01）而Bax蛋白顯著升高（P<0.05），因此Bcl-2/Bax比值明顯降低（P<0.01）；經丁苯酞干預后，上述變化得到明顯逆轉（P<0.01，P<0.01，P<0.01），而NBP-L和NBP-H組之間沒有統(tǒng)計學差異（P>0.05）。
　　4、免疫組化結果
　　與假手術組相比，VD模型組大鼠海馬CA1區(qū)神經元HO-1免疫陽性表達明顯