高通量ELISA檢測(cè)HBV系統(tǒng)化標(biāo)準(zhǔn)化研究及重慶地區(qū)HBV流行病學(xué)調(diào)查分析.pdf

1、高通量酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)的檢測(cè)是臨床實(shí)驗(yàn)室最常用的檢測(cè)乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)血清學(xué)標(biāo)志物的方法，具有靈敏度高、特異型好、價(jià)格低廉的優(yōu)勢(shì)，但同時(shí)又存在操作的重復(fù)性和準(zhǔn)確性差問題，影響著結(jié)果的可靠性。在本研究中我們通過高通量ADDCARE1100全自動(dòng)酶免工作站的儀器硬件檢測(cè)和配套試劑的性能評(píng)價(jià)，來確保ADDCARE1100

2、全自動(dòng)酶免工作站檢測(cè)結(jié)果的可靠性。儀器硬件參數(shù)檢測(cè)包括加樣器加樣精度測(cè)量、洗板殘留量的測(cè)量和孵育微板溫度的測(cè)量;配套試劑的性能評(píng)價(jià)包括:以Architect I2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀為參考方法，對(duì)ADDCAER1100全自動(dòng)酶免工作站進(jìn)行HBV血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)的方法學(xué)對(duì)比，同時(shí)進(jìn)行ADDCARE1100全自動(dòng)酶免工作站的重復(fù)性試驗(yàn)，通過上述試驗(yàn)來進(jìn)行ELISA檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)過程中的系統(tǒng)化和標(biāo)準(zhǔn)化研究。同時(shí)收集2013.6-201

3、4.6重慶市主城和區(qū)縣的4家醫(yī)院不同方法學(xué)檢測(cè)HBV的血清學(xué)標(biāo)志物和被檢測(cè)者基本信息，建立重慶市乙型肝炎病毒信息標(biāo)本庫(kù)，對(duì)重慶市乙型肝炎病毒進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查分析，本研究結(jié)果如下:
　　1.ADDCARE1100全自動(dòng)酶免工作站硬件設(shè)備共有12個(gè)加樣器，每個(gè)加樣器重復(fù)10次，測(cè)量次數(shù)為12×10=120次。加樣器的12個(gè)通道精度都在100±2μl內(nèi)，重復(fù)性符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)CV≤0.75％.。3臺(tái)洗板機(jī)的洗板殘留量都到達(dá)每孔平均殘留量≤2

4、μl要求的結(jié)果;32塊微板在不同時(shí)間段2次的測(cè)量結(jié)果符合溫度T=37℃±0.5℃的要求
　　2.方法學(xué)對(duì)比:兩種檢測(cè)儀器檢測(cè)乙型肝炎病毒表面抗原(hepatitis B surfaceantigen，HBsAg)、乙型肝炎病毒表面抗體（hepatitis B surface antibody, HBsAb）、乙型肝炎病毒e抗原(hepatitis B e antigen，HBeAg)、乙型肝炎病毒e抗體(hepatitis B e

5、antigen，HBeAb)、乙型肝炎病毒核心抗體（hepatitis B core antibody, HBcAb）的總符合率分別為99.0％，99.5％，99.5％，98.0％，100.0％;陽性符合率分別為98.0％，100.0％，99.0％，97.0％，100.0％;陰性符合率分別為100.0％，99.0％，100.0％，99.0％，100.0％;Kappa檢驗(yàn)系數(shù)K分別為0.98，0.99，0.99，0.96，1.00。

6、>　　3.重復(fù)性試驗(yàn):ADDCARE1100檢測(cè)HBsAg、 HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb在±20％濃度的臨界值樣本陽（陰）性率均≥95％，95％可信區(qū)間分別為:96.6％-99.5％，97.6％-99.5％,97.6％-99.5％,94.7％-99.5％,98.6％-99.5％。
　　4.HBV流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果:2013.6-2014.6重慶市大坪醫(yī)院檢驗(yàn)科、南川區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科、黔江中心醫(yī)院檢驗(yàn)科、合川區(qū)中心

7、醫(yī)院檢驗(yàn)科共檢測(cè)乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物（HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb）149762例份標(biāo)本，共得出31種血清學(xué)組合模式;以為HBsAb(+)、HBsAb(+)HBcAb(+)、標(biāo)志物全陰，三種模式為主，占所檢測(cè)人數(shù)的18.02％，17.55％，15.46％。
　　5.HBsAg陽性的性別分布情況:人群中男性HBsAg的陽性率16％，女性HBsAg陽性率為9.82％。
　　6.四個(gè)年齡段的HBsAg

8、陽性、HBsAb陽性分布水平:HBsAg陽性率0-4歲年齡段為4.53％:HBsAg的陽性率5-14歲的年齡段最低為3.48％，HBsAg陽性率15-59歲年齡段最高為14.15％，HBsAg陽性率60歲以上年齡段為10.37％;4個(gè)年齡段的HBsAg陽性率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＜0.01;HBsAb陽性率0-4歲年齡段的最高為65.38％，HBsAb陽性率5-14歲的最低為48.48％，HB sAb陽性率15-59歲年齡段為50.65％，H

9、BsAb陽性率60歲以上年齡段為63.07％;4個(gè)年齡段的HBsAb分布有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＜0.01.
　　7.重慶主城和區(qū)縣HBsAg陽性率的分布情況;共有4家醫(yī)院參加的HBV血清學(xué)的檢測(cè)，主城區(qū)的HBsAg陽性率是10.23％，區(qū)縣3家醫(yī)院HBsAg陽性率是13.78％，主城區(qū)和區(qū)縣的HBsAg陽性率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＜0.01。
　　總結(jié):ADDCARE1100全自動(dòng)酶免工作站的硬件參數(shù)檢測(cè)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，與Architec

10、t I2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀共同檢測(cè)HBV血清學(xué)標(biāo)志物的結(jié)果一致性很好;ADDCARE1100全自動(dòng)酶免工作站檢測(cè)HBV血清學(xué)標(biāo)志物在臨界值±20％的濃度內(nèi)能得到穩(wěn)定結(jié)果。該儀器的的檢測(cè)符合ELISA檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)于準(zhǔn)確性高、重復(fù)性好的臨床要求，以及ELISA檢測(cè)系統(tǒng)的規(guī)范化操作要求，可用于臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)于標(biāo)本的檢測(cè);重慶市HBV流行病學(xué)的調(diào)查總體符合2006年的全國(guó)流行病學(xué)調(diào)查的報(bào)告:兒童和青少年的HBsAg陽性率最低，15至59