丹參酮ⅡA聯(lián)合異基因臍帶間充質(zhì)干細胞治療大鼠肝硬化的研究.pdf

1、目的:觀察異基因人臍帶間充質(zhì)干細胞(Umbilcal cord mesenchymal stem cells，UCMSCs)移植后肝硬化大鼠的生物安全性;研究中藥丹參酮ⅡA聯(lián)合異基因UCMSCs移植治療大鼠肝硬化的效果，以及不同移植途徑對療效的影響。
　　方法:四氯化碳法制備肝硬化大鼠模型。造模成功后，將肝硬化大鼠隨機分為5組，每組15只。分別設(shè)為:對照組，肝動脈介入組，腹腔注射組，尾靜脈移植組，丹參酮ⅡA聯(lián)合尾靜脈移植組。嚴(yán)格按

2、操作流程制備UCMSCs懸液，以細胞膜紅色熒光探針DiI標(biāo)記。每組UCMSCs懸液約含2×107個細胞，終體積為0.2 ml。對照組經(jīng)尾靜脈注入同體積醫(yī)用生理鹽水(0.9％NS)。丹參酮ⅡA聯(lián)合尾靜脈移植組，于移植當(dāng)日開始，經(jīng)腹腔注入20 mg/kg丹參酮ⅡA，連續(xù)7d。記錄UCMSCs移植后各組大鼠的進食、飲水、排便及活動等情況。分別于移植后1d、3d、1m及3m處死大鼠，取肝組織，制備冰凍切片，熒光顯微鏡下觀察UCMSCs的肝內(nèi)定植

3、情況。檢測大鼠靜脈血中白蛋白及谷丙轉(zhuǎn)氨酶的水平。RT-PCR及Western blotting分析大鼠肝組織中人源性白蛋白、細胞角蛋白18的表達量。
　　結(jié)果:異基因UCMSCs移植后的各組大鼠進食、飲水、排便及活動與移植前相比均無明顯異常，各組大鼠均無異常死亡。與模型組比較，經(jīng)尾靜脈注射、肝動脈介入、腹腔注射及UCMSCs聯(lián)合丹參酮Ⅱ治療后，各組大鼠肝組織內(nèi)均發(fā)現(xiàn)UCMSCs的定植，血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶均降低，而白蛋白明顯升高(P＜0

4、.05)。RT-PCR及Western blotting結(jié)果顯示，UCMSCs移植后，各組大鼠肝組織均表達人源性細胞角蛋白18和白蛋白，其中丹參酮ⅡA聯(lián)合UCMSCs治療組的表達量明顯高于尾靜脈移植組(P＜0.05)。三種不同移植途徑，即尾靜脈注射、肝動脈介入及腹腔注射，對大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶及白蛋白的表達無明顯影響(P＞0.05)，三組大鼠肝組織中人源性細胞角蛋白18和白蛋白的表達水平也無明顯差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論:人臍

5、帶間充質(zhì)干細胞移植后能在肝硬化大鼠的肝內(nèi)定植，并具有向肝細胞樣細胞分化的能力，從而改善肝硬化大鼠的肝臟功能;丹參酮ⅡA聯(lián)合UCMSCs移植可在一定程度上增強移植治療的效果。尾靜脈注射、肝動脈介入及腹腔注射三種不同移植途徑對肝硬化的治療效果無明顯影響。說明異基因的人臍帶間充質(zhì)干細胞移植治療肝硬化是安全和有效的。該課題提示，臨床上使用干細胞移植治療肝臟疾病時，可選擇易于操作且創(chuàng)傷小的外周靜脈作為肝臟接受干細胞移植治療的首選方法，聯(lián)合使用中藥