一氧化氮聯(lián)合大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對小鼠肝硬化的治療效應(yīng).pdf

1、目的：建立穩(wěn)定的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells，BMSCs）分離、培養(yǎng)及鑒定體系，并研究一氧化氮（Nitric Oxide，NO）聯(lián)合BMSCs對小鼠肝硬化的治療效果。
　　方法：（1）體外大鼠BMSCs的分離、培養(yǎng)及鑒定：全骨髓貼壁法分離大鼠BMSCs，連續(xù)傳代培養(yǎng)。取第三代細(xì)胞，進(jìn)行流式細(xì)胞表型鑒定，MTT比色法測定細(xì)胞增殖曲線，并進(jìn)行成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)鑒定其分化能力，檢測

2、NO對BMSCs增殖能力的影響；（2）體內(nèi)檢測NO聯(lián)合BMSCs對肝硬化的治療效果：68只雌性 KM小鼠隨機(jī)分為空白組（10只）、模型組（10只）、硝普納（Sodium Nitroprusside，SNP）組（12只）、BMSCs組（12只）、BMSCs+SNP(一次)組（12只）、BMSCs+SNP(多次)組（12只）。45％CCL4腹腔注射造肝硬化模型，10周后 BMSCs組、BMSCs+SNP(一次)組、BMSCs+SNP(多次)

3、組采用性別交叉的移植方法，通過尾靜脈移植BMSCs，SNP組、BMSCs+SNP(一次)組、BMSCs+SNP(多次)組通過腹腔注射SNP，空白組和模型組注射PBS。4周后處死全部小鼠，采血測血清中AST、ALT、ALB；RT-PCR測性別決定區(qū)（SRY） mRNA的含量；HE染色檢測肝纖維化程度。
　　結(jié)果：（1）體外實驗：成功分離、培養(yǎng)大鼠BMSCs，并繪制其生長曲線，流式細(xì)胞鑒定符合間充質(zhì)干細(xì)胞表型，通過茜素紅染色檢測成骨誘

4、導(dǎo)成功；不同濃度梯度的NO及不同加藥次數(shù)對BMSCs增殖無明顯影響(P>0.05)；（2）體內(nèi)實驗：10周后肝硬化模型成功建立；BMSCs組、BMSCs+SNP(一次)組、BMSCs+SNP(多次)組相對于模型組和SNP組ALT、AST水平下降，ALB升高（P<0.05），模型組和SNP組ALT、AST、ALB差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；BMSCs+SNP(多次)組較BMSCs組、BMSCs+SNP(一次)組ALT、AST下降顯著

5、（P<0.05），ALB差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;而BMSCs組、BMSCs+SNP(一次)組ALT、AST、ALB差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）?？瞻捉M、模型組、SNP組無SRY mRNA的表達(dá)，BMSCs組、BMSCs+SNP(一次)組和BMSCs+SNP(多次)組可檢測到SRY mRNA；其中BMSCs+SNP(多次)組較BMSCs+SNP(一次)組、BMSCs組SRY mRNA升高（P<0.05）；BMSCs組較BMS