二甲雙胍聯(lián)合辛伐他汀協(xié)同抑制MDA-MB-231細胞NF-κB通路及生長機制的研究.pdf

1、目的:本實驗分別研究二甲雙胍(Metformin，Met)、辛伐他汀(Simvastatin，Sim)及兩者聯(lián)合在體外對三陰性高侵襲性乳腺癌MDA-MB-231細胞中NF-κB活性的影響，分別檢測單藥及聯(lián)合用藥干預后MDA-MB-231細胞的活性及增值的變化，并進一步探討可能發(fā)生的作用機制?？陀^評價二甲雙胍、辛伐他汀及兩者聯(lián)合是否能夠成為TNBC個體化及綜合性治療的輔助用藥，針對NF-κ B信號通路的靶向治療能否使乳腺癌的綜合性治療更加

2、完善，最終為預防、治療及預后提高TNBC的臨床治療有效率提供新的治療觀點。
　　方法:在體外培養(yǎng)人乳腺癌MDA-MB-231細胞，應用不同濃度的Met(0、0.1、0.5、2.5、12、5mmol/l)、不同濃度的Sim(0、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、7.5、10.0μ mol/l)及兩藥聯(lián)合進行干預24h、48h，用MTT比色法觀察其對該細胞增殖的影響，并進一步探討單藥及兩藥聯(lián)合分別抑制MDA-MB-231細胞的增

3、殖與NF-κ B活性受抑制之間的依賴關系。檢測對照組及各實驗組MDA-MB-231細胞活性、細胞周期的變化。蛋白印跡法(Westernblot)分別檢測實驗組NF-κB、CCND1的變化，為進一步探討MDA-MB-231細胞NF-κB的激活受抑制提供科學依據(jù)。
　　結(jié)果和結(jié)論:
　　1.二甲雙胍對MDA-MB-231細胞生物活性的影響
　　MTT分析結(jié)果顯示，經(jīng)不同濃度的二甲雙胍作用與MDA-MB-231細胞24h后，

4、與溶劑對照組相比，對MDA-MB-231細胞增殖活性有明顯的抑制作用（**P=0.02），作用效果呈藥物濃度依賴性。不同濃度二甲雙胍作用與MDA-MB-231細胞24h后，平均OD值逐漸降低。
　　2.辛伐他汀對MDA-MB-231細胞生物活性的影響
　　MTT分析結(jié)果顯示，經(jīng)不同濃度的辛伐他汀作用于MDA-MB-231細胞24h后，與溶劑對照組相比，對MDA-MB-231細胞增殖活性有明顯的抑制作用（*P=0.01），作用

5、效果呈藥物濃度依賴性。不同濃度辛伐他汀作用與MDA-MB-231細胞24h后，平均OD值逐漸降低。
　　3.二甲雙胍聯(lián)合辛伐他汀對MDA-MB-231細胞生物活性的影響
　　MTT分析結(jié)果顯示，經(jīng)不同濃度二甲雙胍聯(lián)合辛伐他汀作用于MDA-MB-231細胞24h后，與溶劑對照組、單藥相比，對MDA-MB-231細胞增殖活性有非常明顯的抑制作用（***P=0.002），作用效果呈藥物濃度依賴性。
　　4.二甲雙胍、辛伐他汀

6、及二甲雙胍聯(lián)合辛伐他汀對MDA-MB-231細胞凋亡的影響二甲雙胍、辛伐他汀及二甲雙胍聯(lián)合辛伐他汀分別可以誘導MDA-MB-231細胞凋亡，使部分細胞出現(xiàn)皺縮，連接松解，胞漿致密，細胞器退變，形態(tài)不規(guī)則、細胞核固縮、空泡樣變性、核碎裂等凋亡的形態(tài)學變化。給予二甲雙胍、辛伐他汀及二甲雙胍聯(lián)合辛伐他汀抑制細胞活性的最適濃度可以清晰的看到凋亡細胞的比例也在逐漸增加，凋亡細胞有顯著差異。
　　5.二甲雙胍聯(lián)合辛伐他汀對MDA-MB-231

7、細胞周期分布的影響
　　給予二甲雙胍、辛伐他汀及二甲雙胍聯(lián)合辛伐他汀抑制細胞活性的最大濃度，可以清晰的看到MDA-MB-231細胞DNA合成的S期細胞比例下降(P＜0.05)，而相對靜止階段的G0/G1期細胞比例卻明顯上升(P=0.02)。提示二甲雙胍、辛伐他汀及二甲雙胍聯(lián)合辛伐他汀可抑制MDA-MB-231細胞由G0/G1期向S期的轉(zhuǎn)化，且提示我們細胞的增殖率逐漸下降。
　　6.Western blot檢測結(jié)果
　　

8、取對數(shù)生長期細胞，提取細胞總蛋白，Western blot檢測細胞中NF-κB、CyclinD1表達的變化，結(jié)果顯示在沒有經(jīng)過藥物處理的空白對照組，NF-κB、CyclinD1蛋白表達在最高，明顯高于二甲雙胍、辛伐他汀單藥組及聯(lián)合用藥組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，且二甲雙胍組、辛伐他汀組中NF-κB、CyclinD1的表達高于二甲雙胍聯(lián)合辛伐他汀組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，但是二甲雙胍組與辛伐他汀組兩者之間NF-κ