原兒茶酸抑制Aβ誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞的毒性作用及機(jī)制研究.pdf

1、背景:
　　阿爾茨海默癥(Alzheimer's Disease，AD)，是癡呆最常見的原因，在臨床上稱為原發(fā)性老年癡呆癥，是一種常見的起病隱匿的進(jìn)行性發(fā)展的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，患者可因繼發(fā)感染和并發(fā)癥而死亡。AD發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，病因不明，隨著人類社會進(jìn)入老齡化的步伐加快，我國65歲以上老年人口數(shù)目逐年增加，有研究顯示，我國癡呆患者人數(shù)已超過800萬，到2040年，將超過2600萬。癡呆致殘率高，會給家庭和社會帶來沉重的負(fù)擔(dān)。因

2、此，預(yù)防和治療阿爾茨海默病(AD)具有積極的社會性意義，中醫(yī)中藥在AD防治中具有獨(dú)特的地位和廣闊的前景。需明確阿爾茲海默癥的現(xiàn)狀，深入闡明發(fā)病機(jī)制，發(fā)現(xiàn)新的藥物靶點(diǎn)，尋找治療阿爾茲海默癥的有效藥物。
　　原兒茶酸(Protocatechuic acid，PCA)是存在于許多蔬菜和水果中的一種天然酚酸類化合物，并且是很多中藥的活性成分，例如益智仁、丹參、芙蓉等。而益智仁是我國著名的“四大南藥”之一，藥理學(xué)研究報告發(fā)現(xiàn)其具有抗癌，保護(hù)

3、心血管等作用，對神經(jīng)細(xì)胞具有抗衰老、抗氧化、降低興奮性毒性等作用。研究發(fā)現(xiàn)，益智仁的主要成分原兒茶酸具有良好的神經(jīng)保護(hù)作用。關(guān)于原兒茶酸的藥理作用已有大量報道，原兒茶酸具有抗炎、抗氧化、抑制腫瘤的作用;原兒茶酸對缺血、缺氧神經(jīng)元細(xì)胞具有一定的保護(hù)作用;原兒茶酸可顯著抑制MPP+、H2O2或魚藤酮誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞調(diào)亡和氧化應(yīng)激，具有良好的抗氧化和神經(jīng)保護(hù)作用。
　　目的:
　　本實(shí)驗(yàn)研究以Aβ1-42寡聚體誘導(dǎo)PC12細(xì)胞A

4、β沉積的AD細(xì)胞模型，研究原兒茶酸對Aβ1-42寡聚體誘導(dǎo)PC12細(xì)胞毒性的保護(hù)作用及機(jī)制，為更好明確原兒茶酸神經(jīng)保護(hù)作用及作用機(jī)制，進(jìn)一步開發(fā)益智仁及其有效單體原兒茶酸而提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　首先采用免疫熒光法鑒定Aβ1-42纖維寡聚體，將Aβ1-42作用于PC12細(xì)胞，并于不同時間點(diǎn)(0、3、6、9、12、24h)觀察PC12細(xì)胞的形態(tài)，運(yùn)用MTT比色法檢測細(xì)胞存活率以確定造模條件。并且通過MTT比色法檢測原兒

5、茶酸對PC12細(xì)胞的毒性作用。然后采用預(yù)報護(hù)的給藥方式，檢測不同濃度的原兒茶酸對PC12細(xì)胞的干預(yù)作用。通過使用Western-blot的方法來檢測與自噬相關(guān)標(biāo)記蛋白Beclin1的表達(dá)水平，用以驗(yàn)證原兒茶酸對PC12細(xì)胞Aβ沉積的AD細(xì)胞模型的保護(hù)作用機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　1.在顯微鏡下可觀察到當(dāng)12h和24 h時，Aβ1-42淀粉樣白色團(tuán)塊聚集基本穩(wěn)定，無明顯差異，MTT比色法檢測PC12細(xì)胞的損傷率均達(dá)40％，由此可