鉛暴露對斑馬魚胚胎miR-9、miR-219及Dicer時序性表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　1.為了解斑馬魚胚胎發(fā)育過程miRNAs基因（miR-9、miR-219）時序性表達(dá)規(guī)律。
　　2.為了解斑馬魚胚胎發(fā)育過程Dicer酶基因(Dicer)時序性表達(dá)規(guī)律。
　　3.為了解鉛暴露對斑馬魚胚胎miR-9、miR-219及Dicer時序性表達(dá)的影響。
　　方法：
　　實驗一，斑馬魚胚胎發(fā)育過程miR-9、miR-219及Dicer時序性表達(dá)。野生型AB品系斑馬魚胚胎按常規(guī)孵養(yǎng)，用Tri

2、zol法分別提取正常發(fā)育至4、8、12、16、20、24、36、48和72受精后小時(hpf)斑馬魚胚胎的總RNA，莖環(huán)法逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，用熒光定量PCR方法檢測胚胎miR-9、miR-219及Dicer表達(dá)量。
　　實驗二，鉛暴露對斑馬魚胚胎miR-9、miR-219及Dicer時序性表達(dá)的影響。斑馬魚胚胎自1hpf起分別用醋酸鉛質(zhì)量濃度為2.5和12.5μmol/L含鉛胚胎培養(yǎng)液孵養(yǎng)，觀察記錄胚胎發(fā)育形態(tài)及毒性反應(yīng)，以正常孵

3、養(yǎng)的胚胎為對照。用Trizol法分別提取各組發(fā)育至4、10、16、20、24、36、48和72hpf斑馬魚胚胎的總RNA，莖環(huán)法逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，用熒光定量PCR方法檢測胚胎miR-9、miR-219及Dicer表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　　實驗一:在正常胚胎發(fā)育過程中，miR-9、miR-219及Dicer各時段表達(dá)量之間總的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。與胚胎發(fā)育全程的基因平均表達(dá)水平相比，miR-9在8hpf之前表達(dá)量

4、較低（P＜0.05），36hpf后表達(dá)量持續(xù)增高，48hpf和72hpf時表達(dá)量顯著高于平均水平（P＜0.01）。miR-219在8hpf之前表達(dá)量也處于較低水平（P＜0.05），20hpf后迅速增高，24hpf時達(dá)到峰值，并持續(xù)到48hpf（P＜0.01）。Dicer在胚胎早期(4hpf)就有明顯表達(dá)(P＜0.05)，隨后表達(dá)水平迅速下降，16hpf時達(dá)到低點（P＜0.05），然后逐漸回升，直至胚胎末期。
　　實驗二:鉛暴露斑馬

5、魚胚胎miR-9、miR-219及Dicer時序性表達(dá)與對照組比較總的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而且暴露濃度與基因表達(dá)水平之間存有一定的量效關(guān)系。與對照組同時段基因表達(dá)水平比較，2.5μmol/L鉛暴露組在10和24hpf、12.5μmol/L鉛暴露組在16和24hpf時段miR-9表達(dá)量有顯著性差異(P＜0.05)。鉛暴露組miR-219在10、16和20hpf時段表達(dá)量有顯著性降低(P＜0.05)。鉛暴露組Dicer表達(dá)量在

6、4、10、16、20、48及72hpf等大多數(shù)時段均顯著性低于對照（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.斑馬魚胚胎發(fā)育過程miR-9、miR-219時序性表達(dá)有其一定規(guī)律，miR-9主要在胚胎后期表達(dá);miR-219主要在胚胎中期表達(dá)。
　　2.斑馬魚胚胎發(fā)育過程Dicer時序性表達(dá)有其一定規(guī)律，主要在胚胎早期表達(dá)，其次在胚胎后期。
　　3.鉛暴露能夠干擾胚胎發(fā)育過程miR-9、miR-219及Dicer時序性