斑馬魚胚胎fgfrs與下游通路基因時序性表達(dá)及關(guān)系.pdf

1、[目的]：
　　1.為了解正常情況斑馬魚胚胎發(fā)育過程中fgfrs基因fgfrla、fgfr1b、fgfr2、fgfr3、fgfr4)的時序性表達(dá)規(guī)律以及fgfrs基因之間的關(guān)系。
　　2.為了解正常情況斑馬魚胚胎發(fā)育過程中fgfrs下游信號通路基因akt1、mapk1、plcγ1的時序性表達(dá)規(guī)律以及它們之間的關(guān)系。
　　3.為了解正常情況斑馬魚胚胎發(fā)育過程中fgfrs基因與其下游信號通路基因之間的關(guān)系。
　　[方

2、法]：
　　從斑馬魚胚胎受精后開始計時，選取正常發(fā)育胚胎至EM液中于光照培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)，光周期為明14h:暗10h，采用Trizol法提取正常發(fā)育至4、6、10、12、18、24、48和72hpf斑馬魚胚胎總RNA，檢測合格后經(jīng)過逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)轉(zhuǎn)變成cDNA，采用熒光定量PCR方法檢測上述各時間點胚胎fgfrs fgfr1a、fgfr1b，fgfr2、fgfr3、fgfr）及下游信號通路基因akt1、mapk、plcy1 mRNA的

3、相對表達(dá)量，并分析基因fgfrs表達(dá)量之間、下游信號通路基因之間以及fgfrs與下游信號通路基因之間的關(guān)系。
　　[結(jié)果]：
　　1.斑馬魚胚胎發(fā)育過程fgfrs mRNA動態(tài)表達(dá)有明顯的峰谷現(xiàn)象(P＜0.01)，胚胎fgfrs開始表達(dá)階段依次為fgfr1a與fgfr1b（囊胚期）、fgfr4（原腸胚初期）、fgfr2（原腸胚期）及fgfr3（原腸胚后期），其表達(dá)高峰期分別在原腸胚期、原腸胚后期、體節(jié)期及胚胎發(fā)育中后期。

4、r>　　2.斑馬魚胚胎發(fā)育過程基fgfr1a與fgfr1b動態(tài)表達(dá)趨勢相似（r=0.830，P＜0.05）。fgfr1a與fgfr3、fgfr1b與fgfr4、fgfr2與fgfr3 mRNA表達(dá)量之間相關(guān)分析也有意義（r值分別為-0.726，0.821及0.772，P＜0.05）。
　　3.斑馬魚胚胎發(fā)育過程基因akt1、mapk1及plcγ1mRNA動態(tài)表達(dá)也有明顯的峰谷現(xiàn)象(P＜0.01)，其中基因mapk1與plcy1表達(dá)

5、高峰期都在囊胚期，囊胚期后表達(dá)量銳減，而基因akt1體節(jié)期之前表達(dá)水平較低，高峰期出現(xiàn)在胚胎發(fā)育中后期。
　　4.斑馬魚胚胎發(fā)育過程基因mapk1與plcy1動態(tài)表達(dá)趨勢相似（r=0.883，P＜0.01）。
　　5.斑馬魚胚胎發(fā)育過程基fgfrs與akt1、mapk1、plcγ mRNA表達(dá)量之間以負(fù)性關(guān)系為主，其中基因plcγ1與 fgfr2，akt1與 fgfr1a、fgfr1b、fgfr3 mRNA表達(dá)量之間相關(guān)分析

6、也有意義（r值分別為-0.728，-0.795，-0.724及0.848，P＜0.05）。
　　[結(jié)論]：
　　1.斑馬魚胚胎發(fā)育過程fgfrs時序性表達(dá)有一定規(guī)律性，fgfr1、fgfr4、mapk1、plcγ1主要參與胚胎早期發(fā)育調(diào)控，fgfr2、fgfr3、akt1主要參與胚胎中、后期發(fā)育調(diào)控。
　　2.基因fgfr1a與fgfr1b共表達(dá)使其調(diào)控作用具有冗余能力，基因fgfr1與fgfr3之間在表達(dá)上可能存在相