MXC,BPA聯(lián)合暴露對(duì)斑馬魚(yú)胚胎及精子活性的毒性研究.pdf

1、甲氧滴滴涕(Methoxychlor,MXC)和雙酚A(Bisphenol-A，BPA)廣泛應(yīng)用于工業(yè)和生活領(lǐng)域中，己經(jīng)對(duì)環(huán)境和人類(lèi)健康構(gòu)成了嚴(yán)重的威脅，近年來(lái)備受人們關(guān)注。MXC和BPA具有難降解性、生物蓄積性和沿食物鏈在生物體內(nèi)富集作用，已經(jīng)成為一種新型的持久性有機(jī)環(huán)境污染物。目前對(duì)MXC與BPA的毒性研究尚不全面，特別是在水生生物中的研究相對(duì)較少，且MXC與BPA復(fù)合染毒在斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育中的毒性和生殖系統(tǒng)的毒性研究在國(guó)內(nèi)外還未見(jiàn)報(bào)

2、導(dǎo)。
　　 本文以斑馬魚(yú)胚胎為實(shí)驗(yàn)材料，優(yōu)化了利用斑馬魚(yú)胚胎檢測(cè)化合物毒性的實(shí)驗(yàn)方法，并以MXC，BPA單一染毒為研究對(duì)象，進(jìn)行了急性毒性實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，自6hpf染毒至96hpf,MXC與BPA單一染毒的半數(shù)致死濃度(LC50)分別為24.32μmol·L-1和44.93μmol·L-1。
　　 1.0μmol·L-1的MXC提早了斑馬魚(yú)胚胎48hpf時(shí)的孵化；而B(niǎo)PA暴露后，胚胎在48hpf時(shí)不孵化，在72hpf時(shí)才

3、孵化，且高濃度的BPA抑制其孵化；當(dāng)1.0μmol·L-1的MXC和不同濃度的BPA復(fù)合染毒時(shí)，胚胎的孵化情況與BPA單獨(dú)染毒時(shí)類(lèi)似。MXC對(duì)72hpf幼魚(yú)主要的致畸效應(yīng)為脊柱彎曲，主要表現(xiàn)為脊柱側(cè)凸和脊柱后凸：BPA單一暴露，低劑量的MXC與BPA復(fù)合暴露對(duì)幼魚(yú)不會(huì)造成畸形的現(xiàn)象。
　　 在1.0μmol·L-1的MXC濃度下，都不引起孵化率的差異和胚胎畸形的出現(xiàn)，而5.0μmol·L-1的MXC對(duì)胚胎的孵化具有毒性效應(yīng)，能產(chǎn)

4、生胚胎的畸形。所以在本次實(shí)驗(yàn)中我們認(rèn)為，1.0μmol·L-1的MXC對(duì)斑馬魚(yú)的胚胎是未觀察到損害作用的劑量（no-observedadverseeffectlevel，NOAEL），5.0μmol·L-1的MXC對(duì)斑馬魚(yú)的胚胎是觀察到損害作用的最低劑量(lowestobservedadverseeffectlevel，LOAEL)。
　　 利用吖啶橙染色技術(shù)檢測(cè)24hpf胚胎內(nèi)細(xì)胞凋亡，結(jié)果顯示在胚胎的腦部、眼睛、腹部、卵黃囊

5、和尾部出現(xiàn)大量的細(xì)胞凋亡。
　　 行為學(xué)研究中的基本活力測(cè)試結(jié)果表明，胚胎自6hpf染毒至120hpf后脫毒的斑馬魚(yú)幼魚(yú)，MXC可以使幼魚(yú)的游泳速度減慢，游泳距離變短，而B(niǎo)PA單一暴露，MXC與BPA復(fù)合暴露對(duì)幼魚(yú)的游泳速度與游泳距離未見(jiàn)毒性效應(yīng)。這些結(jié)果說(shuō)明MXC在斑馬魚(yú)胚胎中有發(fā)育和潛在的神經(jīng)毒性。
　　 最后，本實(shí)驗(yàn)還研究了MXC，BPA單一暴露以及復(fù)合暴露后斑馬魚(yú)精子活力的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)過(guò)MXC，BPA及其復(fù)合

6、暴毒之后的成年雄性斑馬魚(yú)，其體長(zhǎng)，體重和精巢重與對(duì)照組相比，并沒(méi)有發(fā)生明顯的變化。但是經(jīng)過(guò)MXC，BPA單一暴露以及復(fù)合暴露后，運(yùn)用計(jì)算機(jī)輔助精液分析儀(ComputerAssistedSpermAnalysis，CASA)來(lái)檢測(cè)精子的活力，發(fā)現(xiàn)其精子活力與正常對(duì)照組和DMSO溶劑對(duì)照組相比有一定程度的下降，且差異顯著。實(shí)驗(yàn)中沒(méi)有采用卵黃蛋白原(Vtg)作為實(shí)驗(yàn)指標(biāo)，而采用了精子活力作為環(huán)境雌激素污染物暴露后的生物標(biāo)志物，操作步驟簡(jiǎn)單，