疏肝理氣法對大鼠胃Cajal間質(zhì)細(xì)胞分化活性影響及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：通過離體細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究疏肝理氣法對大鼠胃Cajal間質(zhì)細(xì)胞的分化活性影響，并基于Ca2+通道、SCF/c-kit信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路探討其作用機(jī)制。
　　方法：⑴制備含藥血清，分成實(shí)驗(yàn)組：5％、10%、20%濃度柴胡疏肝散含藥血清，條件對照組：10%濃度嗎丁啉含藥血清，空白組：10%濃度生理鹽水含藥血清。⑵急性分離、Ⅱ型膠原酶酶解法提取正常大鼠胃竇Cajal間質(zhì)細(xì)胞（interstitial cells of Cajal，ICC）并采

2、用M199完全培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞原代培養(yǎng)，在倒置顯微鏡下觀察。⑶免疫熒光染色法鑒定培養(yǎng)細(xì)胞為ICC并通過正置熒光顯微鏡觀察確定，MTT法測定ICC對數(shù)生長曲線。⑷通過CCK-8法檢測細(xì)胞活性（含藥血清作用后24h、48h、72h）、Fluo-3熒光檢測ICC內(nèi)Ca2+變化并采用激光共聚焦顯微鏡觀察、Western Blot檢測CaM、SCF、c-kit蛋白表達(dá)（含藥血清作用后72h），進(jìn)而比較各組含藥血清對大鼠胃竇 ICC分化活性的影響。<

3、br>　　結(jié)果：ICC在倒置顯微鏡下形態(tài)特征明顯，對數(shù)生長曲線反映該細(xì)胞生長特征，免疫熒光染色及熒光顯微鏡觀察鑒定可見該細(xì)胞的特異性膜結(jié)合蛋白c-Kit陽性表達(dá)顯色，提示ICC培養(yǎng)成功。與空白組比較，條件對照組與實(shí)驗(yàn)組24h、48h、72h的ICC活性，細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度，10%嗎丁啉組CaM、c-Kit蛋白表達(dá)，以及10%、20%柴胡疏肝散組CaM、SCF、c-Kit蛋白表達(dá)均顯著增強(qiáng)（P＜0.05）。與10%嗎丁啉組比較，10%、2

4、0%柴胡疏肝散組24h、48h、72h的ICC活性，細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度與CaM蛋白表達(dá)，以及20%柴胡疏肝散組SCF、c-kit蛋白表達(dá)均顯著增強(qiáng)（P＜0.05）。與5%柴胡疏肝散組比較，10%、20%柴胡疏肝散組48h、72h的ICC活性，細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度，以及20%柴胡疏肝散組CaM、SCF、c-Kit蛋白表達(dá)均顯著增強(qiáng)（P＜0.05）。與10%柴胡疏肝散組比較，20%柴胡疏肝散組72h的ICC活性，以及c-Kit蛋白表達(dá)顯著增強(qiáng)