香茶藨子葉片中總酚酸、總黃酮提取及生物活性研究.pdf

1、在本實驗中采用低共熔溶劑作為提取溶劑，利用負(fù)壓空化提取技術(shù)對不同時期香茶藨子葉片中總酚酸、總黃酮進行綠色高效提取，通過HPLC對香茶藨子葉片中沒食子酸、綠原酸、蘆丁、阿魏酸、異槲皮苷5種常見生物活性成分進行定性定量分析，結(jié)合體外抗氧化、抗腫瘤實驗對其生物活性進行比較，結(jié)果如下:
　　1.對香茶藨子葉片中總酚酸、總黃酮的提取工藝參數(shù)進行了BBD實驗設(shè)計和工藝優(yōu)化，確定了最優(yōu)的負(fù)壓空化輔助低共熔溶劑提取的參數(shù):低共熔溶劑組分:乳酸、氯

2、化膽堿(2∶1，mol/mol);低共熔溶劑含水量:25％;低共熔溶劑與植物粉末液固比:26∶1 mL/g;負(fù)壓壓力:-0.08 MPa;提取溫度:50℃;提取時間:25 min;提取次數(shù):2。在上述優(yōu)化條件下進行了驗證實驗，香茶蔗子葉片中總酚酸、總黃酮提取量的平均值分別為:95.78 mg/g和33.63 mg/g，提取含量高于超聲輔助低共熔溶劑提取和70％乙醇結(jié)合負(fù)壓空化提取的提取量。
　　2.比較2014年5月～11月采集的

3、7個時期點香茶藨子葉片中總酚酸、總黃酮含量，結(jié)果表明7月16日采集的樣品中總酚酸含量最高，8月14日采集的樣品中總黃酮含量最高。建立了沒食子酸、綠原酸、蘆丁、阿魏酸、異槲皮苷5種常見生物活性成分的HPLC-UV分析檢測方法:
　　色譜條件:色譜柱:C18(5μm，250×4.6 mm i.d.);流動相:0.10％磷酸水溶液(A)-乙腈(B);流速1 mL/min;柱溫為35℃;進樣量:10μL;檢測波長:273 nm和320 n

4、m;梯度洗脫條件:0-6 min，9-18％(B);6-13 min，18-25％(B);13-23 min，25-40％(B);23-25 min,40-60％(B)。
　　測得不同時期采集的香茶蔗子葉片中沒食子酸、異槲皮苷含量最大值出現(xiàn)在7月16日樣品中分別為17.23 mg/mL和1.58 mg/mL;綠原酸、蘆丁含量最大值出現(xiàn)在8月14日樣品中分別為3.68 mg/mL和7.42 mg/mL;阿魏酸含量最大值出現(xiàn)在6月16

5、日樣品中為3.35 mg/mL。
　　3.通過DPPH自由基清除能力測定、抑制羥基自由基(·OH)能力測定和抑制超氧陰離子自由基能力測定比較不同時期香茶藨子葉片粗提物的抗氧化活性，三組實驗結(jié)果均顯示8月14日采集的茶藨子葉片抗氧化能力最強。測定不同時期香茶藨子葉片粗提物對人乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖的抑制作用結(jié)果表明，8月14日采集的香茶藨子葉片粗提物抗腫瘤活性最強，IC50=0.48 g/mL，并且對MCF-7細(xì)胞的抑制作用呈時間

6、-劑量效應(yīng)關(guān)系。結(jié)合上一章總酚酸、總黃酮含量的測定結(jié)果，初步判斷香茶藨子葉片粗提物活性與其總黃酮含量的相關(guān)性高于與總酚酸的相關(guān)性。
　　綜上所述，負(fù)壓空化輔助低共熔溶劑提取非常適用于香茶蔗子葉片中總酚酸、總黃酮的提取，低共熔溶劑作為一種新型提取溶劑，具有穩(wěn)定性好，可生物降解，低毒性，對不同極性化合物提取能力高等優(yōu)點，可成為提取植物材料中活性成分的綠色溶劑。結(jié)合生物活性實驗及HPLC-UV分析確定香茶蔗子葉片的最佳利用期為8月份，對