全反式維甲酸在肝缺血再灌注損傷中的作用機制研究.pdf

1、肝臟缺血再灌注(ischemia-reperfusion，IR)損傷是臨床工作中常會遇見的問題，并且，隨著國家取消尸肝供體移植，心死亡后器官捐獻(xiàn)的(Donation aftercirculation death，DCD)肝臟已經(jīng)成為當(dāng)今肝移植的主要來源，而DCD供肝的缺血再灌注損傷程度將會明顯影響移植肝的功能恢復(fù)，甚至?xí)Q定肝移植手術(shù)的成敗，因此如何有效地減輕肝臟IR損傷程度將是DCD供肝肝移植手術(shù)成功的關(guān)鍵。全反式維甲酸（all-tr

2、ans retinoic acid，ATRA）是臨床上用來治療急性早幼粒白血病的常用藥，現(xiàn)在研究發(fā)現(xiàn)ATRA也具有減輕肝IR損傷，但是其具體作用機制還不清楚。
　　目的:
　　本實驗旨在闡釋ATRA在肝IR損傷中的作用機制。
　　方法:
　　體內(nèi)實驗:采用70％肝IR損傷模型，分為空白組，IR組和ATRA預(yù)處理組，在相應(yīng)時間點，采血后處死小鼠并取材，進(jìn)行肝功能檢測，觀察肝臟病理并評分，并利用RT-PCR和蛋白印記

3、等技術(shù)對相應(yīng)指標(biāo)進(jìn)行檢測;體外實驗:采用過氧化氫(Hydrogen peroxide，H2O2)和脂多糖（lipopolysaccharides，LPS）分別處理小鼠肝細(xì)胞FL83B和巨噬細(xì)胞RAW264.7，分組情況均為DMSO、H2O2/LPS、ATRA預(yù)處理和LE540預(yù)處理組，在相應(yīng)時間點，收集細(xì)胞后，再利用RT-PCR和蛋白印記等技術(shù)進(jìn)行分析。
　　結(jié)果:
　　(1) IR組中，肝功能、肝臟組織病理評分均高于空白組

4、且有統(tǒng)計學(xué)差異;
　　(2) ATRA預(yù)處理組中，肝功能及肝臟組織病理評分均低于IR組，炎癥因子TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA等水平也有明顯下降;(3) ATRA預(yù)處理組中，維甲酸受體α、Bcl-2、p-Akt、Beclin1和LC3Ⅱ/Ⅰ等蛋白水平均高于IR組，cleaved-caspase3、Foxo1、TLR4、NF-κB p65和p62等蛋白水平低于IR組;(4)在FL83B試驗中，ATRA預(yù)處理后使細(xì)胞凋亡減少

5、，維甲酸受體α、Bcl-2、p-Akt、Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ等蛋白水平均高于H2O2組，cleaved-caspase3、Foxo1、p62等蛋白水平低于H2O2組，而LE540預(yù)處理后損傷明顯加重;(5)在RAW264.7試驗中，ATRA預(yù)處理組中，炎癥因子TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA等水平明顯下降，維甲酸受體α、p-Akt、Beclin1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ等蛋白水平均高于LPS組，F(xiàn)oxo1、TLR4、NF-κ