采用組織芯片方法篩選口腔黏膜白斑惡變相關(guān)蛋白.pdf

1、目的:口腔黏膜白斑(Oral leukoplakia，OLK)是指口腔內(nèi)白色病變而未被診斷為其他的具體疾病者，如扁平苔蘚、白色水腫等。口腔鱗狀細胞癌(Oral squamouscell carcinoma，OSCC)是世界上第六常見的癌癥，占口腔惡性腫瘤的90％以上。世界上每年因口腔鱗狀細胞癌發(fā)病死亡的病例有將近500，000例，并且其預(yù)后較差，5年生存率約為50％左右。口腔鱗狀細胞癌主要是由口腔癌前病變，尤其是口腔黏膜白斑受煙草等致癌

2、物質(zhì)反復(fù)刺激所致。然而，口腔黏膜白斑惡變?yōu)榭谇击[狀細胞癌的機制目前還不明確。因此尋找口腔黏膜白斑惡變的分子標志物，對預(yù)防口腔鱗狀細胞癌的發(fā)生和早期診斷具有重要的現(xiàn)實意義。在本次工作中，我們前期建立了口腔鱗狀細胞癌的細胞模型OSCC-BD細胞系，通過基因芯片篩選出口腔黏膜白斑細胞系及其誘導(dǎo)惡變的OSCC-BD細胞系之間的差異基因組，經(jīng)過RNA水平的驗證，并進一步在這兩種細胞系及臨床病理組織中進行驗證，以尋找口腔黏膜白斑惡變的分子標志物，為

3、全面揭示口腔黏膜白斑惡變機制及早期治療靶點提供新線索。
　　方法:分別體外培養(yǎng)口腔黏膜白斑細胞及其誘導(dǎo)惡變的OSCC-BD細胞，提取兩種細胞總蛋白，通過蛋白免疫印跡法(Western Blotting，WB)檢測ProteinX和ProteinY在兩種細胞系中的表達情況。進一步選取中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院病理科180例口腔鱗狀細胞癌患者石蠟包埋臨床組織，構(gòu)建口腔鱗癌組織及其癌旁正常組織的臨床組織芯片，通過免疫組織化學(xué)法(immuno

4、histochemistry，IHC)檢測ProteinX和ProteinY在OSCC癌組織及癌旁正常組織間的表達差異，并分析其表達情況與臨床病理特征之間的關(guān)系。
　　結(jié)果:采用WB檢測結(jié)果提示:ProteinX在口腔黏膜白斑細胞誘導(dǎo)惡變的OSCC-BD細胞中高表達，在癌前的口腔黏膜白斑細胞細胞中不表達;ProteinY在OSCC-BD細胞中不表達，在癌前的口腔黏膜白斑細胞細胞中高表達。
　　采用IHC在臨床組織芯片中的檢測

5、結(jié)果提示:ProteinX的表達主要位于細胞質(zhì)中，ProteinX在OSCC癌組織及其癌旁正常組織中的陽性表達率分別為75％(135/180)和39％(71/180)，ProteinX在OSCC癌組織中的表達顯著高于其在癌旁正常組織中的表達，兩組間有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.001）;ProteinY的表達主要位于細胞核中，ProteinY在OSCC癌組織及其癌旁正常組織中的陽性表達率分別為20％(35/180)和33％(60/180)，Pr