多西他賽陽(yáng)離子脂質(zhì)體的研究.pdf

1、多西他賽(docetaxel)是一種半合成的紫杉類衍生物，為細(xì)胞周期特異性廣譜抗癌藥。雖然多西他賽具有很高的抗癌活性，但是其水溶性差大大限制了多西他賽的發(fā)展應(yīng)用。市售制劑泰索帝含大量吐溫-80，會(huì)引發(fā)嚴(yán)重不良反應(yīng)，應(yīng)用前須多次服用糖皮質(zhì)激素類藥物以防過(guò)敏反應(yīng)和液體潴留，臨床應(yīng)用不便，所以有必要開(kāi)發(fā)一種新的劑型以改善多西他賽的溶解性能。
　　陽(yáng)離子脂質(zhì)體早期作為基因載體廣泛應(yīng)用于基因轉(zhuǎn)染和基因治療的研究，近來(lái)也有學(xué)者將陽(yáng)離子脂質(zhì)體作

2、為抗腫瘤藥物的載體展開(kāi)研究。陽(yáng)離子脂質(zhì)體通常是由一種陽(yáng)離子兩親性化合物和一種中性磷脂組成的封閉囊泡，磷脂分子的疏水尾部聚集在一起，避開(kāi)水相，而親水頭部暴露在水相。如將多西他賽扦插于磷脂雙分子層疏水尾部之間，則會(huì)避開(kāi)與水的直接接觸，提高在水中的溶解度。
　　腫瘤新生血管生長(zhǎng)快速，其內(nèi)皮細(xì)胞表面攜帶的負(fù)電荷遠(yuǎn)大于普通靜態(tài)血管，陽(yáng)離子脂質(zhì)體可以通過(guò)靜電作用與腫瘤新生血管內(nèi)皮細(xì)胞相互作用，被迅速吞噬，同時(shí)破壞內(nèi)吞小體的脂膜，將藥物釋放到胞

3、漿中，加快藥物從胞漿到細(xì)胞核的轉(zhuǎn)運(yùn)速度。這種機(jī)制顯著提高了藥物在腫瘤區(qū)的聚集和釋放。
　　目的：
　　本研究將多西他賽載入含陽(yáng)離子磷脂的的脂質(zhì)體中，以提高多西他賽的溶解度和治療效果，并對(duì)所得制劑的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)及體內(nèi)外藥效學(xué)進(jìn)行考察。
　　方法：
　　建立主要組成材料多西他賽、DOTAP-Cl、DOPC的含量以及包封率測(cè)定方法并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。
　　多西他賽陽(yáng)離子脂質(zhì)體的制備方法采用乙醇注入法，載藥方式為被動(dòng)載

4、藥。選擇DOTAP-Cl（1,2-二油酰基羥丙基-3-N,N,N-三甲胺氯）和DOPC（1,2-二油酰磷脂酰膽堿）作為組成磷脂，二水海藻糖溶液作為水相，多西他賽和磷脂溶于乙醇作為脂相，將脂相滴注于水相中攪拌即形成脂質(zhì)體。將脂質(zhì)體通過(guò)聚碳酸酯膜擠出以達(dá)到合適粒度，并將擠出后的脂質(zhì)體進(jìn)行凍干以進(jìn)一步提高脂質(zhì)體的穩(wěn)定性。
　　針對(duì)制備過(guò)程中可能影響藥物穩(wěn)定性的因素設(shè)計(jì)單因素試驗(yàn)。以脂質(zhì)體粒徑分布和包封率為指標(biāo)，考察了磷脂組成、脂相濃度、

5、水相糖溶液濃度、水相 pH、脂相與水相比例和注入速度對(duì)脂質(zhì)體物理性質(zhì)的影響。最終確定多西他賽陽(yáng)離子脂質(zhì)體最佳處方和工藝條件。
　　對(duì)在最佳處方和工藝下制備的脂質(zhì)體進(jìn)行質(zhì)量研究，主要包括外觀、pH值、滲透壓、粒徑分布、Zeta電位、包封率和含量等指標(biāo)的測(cè)定?？疾於辔魉愱?yáng)離子脂質(zhì)體混懸液24 h的穩(wěn)定性和凍干品6個(gè)月的穩(wěn)定性。
　　建立血漿中多西他賽和DOTAP-Cl的檢測(cè)方法并進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證。以雄性 Wistar大鼠為實(shí)驗(yàn)

6、動(dòng)物進(jìn)行了藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)，對(duì)多西他賽陽(yáng)離子脂質(zhì)體體內(nèi)行為進(jìn)行了初步探索。分別尾部靜脈注射多西他賽陽(yáng)離子脂質(zhì)體和泰索帝，給藥劑量均為4 mg·kg-1，給藥速度為12mg·kg-1·min-1。
　　MTT法進(jìn)行體外藥效試驗(yàn)，試驗(yàn)組包括多西他賽陽(yáng)離子脂質(zhì)體、空白陽(yáng)離子脂質(zhì)體和泰索帝?？紤]到多西他賽臨床主要應(yīng)用于乳腺癌、卵巢癌和肺癌的治療，采用 MCF-7細(xì)胞（人乳腺癌）和 A549細(xì)胞（人肺腺癌細(xì)胞）。
　　在雌性BDF1小鼠

7、左前肢腋部皮下接種LLC細(xì)胞（小鼠肺癌細(xì)胞）長(zhǎng)成實(shí)體瘤，以此為動(dòng)物模型進(jìn)行多西他賽陽(yáng)離子脂質(zhì)體體內(nèi)藥效學(xué)研究，比較了多西他賽陽(yáng)離子脂質(zhì)體、空白陽(yáng)離子脂質(zhì)體和泰索帝的腫瘤抑制率。
　　結(jié)果：
　　通過(guò)試驗(yàn)確定最佳處方為：DOTAP-Cl、DOPC和多西他賽的摩爾比為50:43:7；總脂相濃度為1500 mM；水相為110 g/L的二水海藻糖溶液（pH4.5-5.5）；脂相和水相體積比為1:74，注入速度為1.0 mL/min；

8、注入結(jié)束后進(jìn)行擠出整粒；以水相為透析液透析八倍體積后分裝凍干，冷藏儲(chǔ)存。
　　以最佳處方和工藝制備的脂質(zhì)體為均一的白色凍干物，加水10 mL輕輕搖晃可快速?gòu)?fù)溶。三批平行樣品復(fù)溶后物理性質(zhì)接近，粒徑為160 nm，粒度分布良好（PDI<0.1），pH（5.0）和滲透壓（310 mOsmol/Kg）符合注射劑標(biāo)準(zhǔn)，多西他賽濃度可達(dá)1 mg/mL，包封率高達(dá)98％以上。脂質(zhì)體復(fù)溶后在冷藏或冷凍條件下24 h內(nèi)可保持穩(wěn)定性，脂質(zhì)體凍干品冷

9、藏儲(chǔ)存6個(gè)月后各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)明顯變化。
　　藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)結(jié)果顯示，多西他賽陽(yáng)離子脂質(zhì)體的多西他賽濃度-時(shí)間曲線與泰索帝相似，均在輸液開(kāi)始后1 min即達(dá)到最大值，隨后迅速下降。而DOTAP-Cl濃度-時(shí)間曲線則在30 min時(shí)達(dá)到最高點(diǎn)，且5 min-60 min時(shí)間內(nèi)濃度浮動(dòng)不大，隨后下降也較為緩和。
　　體外藥效試驗(yàn)結(jié)果顯示，多西他賽陽(yáng)離子脂質(zhì)體、空白陽(yáng)離子脂質(zhì)體和泰索帝對(duì) MCF-7細(xì)胞和 A549細(xì)胞均有抑制作用。在

10、低濃度范圍內(nèi)多西他賽陽(yáng)離子脂質(zhì)體抑制效果穩(wěn)定且優(yōu)于泰索帝。
　　體內(nèi)藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果顯示，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，多西他賽陽(yáng)離子脂質(zhì)體、泰索帝和空白陽(yáng)離子脂質(zhì)體對(duì)LLC細(xì)胞瘤的抑制率分別為為58.1%、29.6%及12.9%。多西他賽陽(yáng)離子脂質(zhì)體治療效果顯著優(yōu)于泰索帝（P<0.01）。
　　結(jié)論：
　　陽(yáng)離子脂質(zhì)體工藝過(guò)程簡(jiǎn)單易控、多西他賽濃度達(dá)、包封率高、物理性質(zhì)穩(wěn)定；脂質(zhì)體所含的多西他賽與泰索帝具有相似的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)特征，剩余