雷公藤紅素對(duì)HLA-B27基因啟動(dòng)子活性影響的研究.pdf

1、目的:
　　通過(guò)觀(guān)察雷公藤紅素對(duì)AS患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclearcell，PBMC)活性的影響，檢測(cè)不同濃度雷公藤紅素作用下HLA-B27及其啟動(dòng)子相關(guān)激活因子TNF-α，IFN-γ，IL-1β，IL-6表達(dá)的變化，為雷公藤治療AS的分子機(jī)制提供新的依據(jù)。
　　方法:
　　1、為了研究雷公藤紅素對(duì)AS患者PBMC的細(xì)胞毒作用，本實(shí)驗(yàn)采用3例確診AS患者外周血，提取PBM

2、C進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，24小時(shí)后加入不同濃度雷公藤紅素，共同培養(yǎng)48小時(shí)后進(jìn)行Cell Counting Kit-8(CCK-8)檢測(cè)，以評(píng)估雷公藤紅素對(duì)PBMC細(xì)胞活性的影響。
　　2、為了證明雷公藤紅素對(duì)AS患者PBMC中HLA-B27基因啟動(dòng)子可能存在抑制作用，本實(shí)驗(yàn)采用10例確診AS患者10ml外周血提取PBMC，24小時(shí)后加入不同濃度雷公藤紅素，共同培養(yǎng)48小時(shí)后提取RNA，采用Real-time PCR的方法檢測(cè)細(xì)胞中HLA

3、-B27和TNF-α，IFN-γ，IL-1β及IL-6 mRNA表達(dá)變化。同時(shí)收集上清液，采用ELISA的方法檢測(cè)HLA-B27和TNF-α，IFN-γ，IL-1β，IL-6細(xì)胞因子水平變化。
　　結(jié)果:
　　1、發(fā)現(xiàn)雷公藤紅素濃度低于1.0μmol/L時(shí)，對(duì)AS患者PBMC細(xì)胞活性無(wú)明顯抑制作用(p＞0.05);當(dāng)濃度高于3.0μmol/L時(shí)，雷公藤紅素對(duì)PBMC細(xì)胞活性呈明顯抑制作用(p＜0.05)。
　　2、發(fā)現(xiàn)

4、AS患者PBMC加藥組與對(duì)照組相比，HLA-B27和TNF-α，IFN-γ，IL-1β，IL-6 mRNA量隨雷公藤紅素濃度增高而呈降低趨勢(shì)，特別是當(dāng)雷公藤紅素濃度為1.0μmol/L時(shí)，抑制作用最強(qiáng)，其中HLA-B27和TNF-α，IL-1β，IL-6 mRNA表達(dá)量的變化具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05); AS患者PBMC加藥組與對(duì)照組相比，HLA-B27和TNF-α，IFN-γ，IL-1β，IL-6細(xì)胞因子水平呈降低趨勢(shì)，同樣當(dāng)雷公

5、藤紅素濃度為1.0μmol/L時(shí)，抑制作用最強(qiáng)，其中TNF-α，IL-1β，IL-6水平的變化具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、雷公藤紅素在高濃度時(shí)對(duì)AS患者PBMC細(xì)胞活力有抑制作用，但在一定濃度范圍內(nèi)對(duì)PBMC細(xì)胞活力無(wú)明顯影響，說(shuō)明在一定濃度范圍內(nèi)雷公藤紅素?zé)o明顯細(xì)胞毒性。
　　2、雷公藤紅素作用下HLA-B27和TNF-α，IFN-γ，IL-1β，IL-6表達(dá)均降低，提示雷公藤紅素可能通過(guò)抑