TGFβ1和TLR4在T24細(xì)胞中的表達(dá)及相互作用.pdf

1、背景：
　　膀胱癌是世界范圍內(nèi)男性中第7位常見惡性腫瘤，女性第17位常見惡性腫瘤。作為最常見的膀胱癌亞型，膀胱移行細(xì)胞癌約占所有膀胱癌的90％，浸潤和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者死亡的主要原因。腫瘤的轉(zhuǎn)移過程包括：侵襲相鄰組織，滲透進(jìn)入淋巴/血管系統(tǒng)，脫離原發(fā)灶，蔓延至附近或遠(yuǎn)處特定部位之后，經(jīng)過侵襲、增殖、血管重塑等過程形成新的轉(zhuǎn)移性病灶。雖然目前膀胱癌的診斷和治療研究取得了很大進(jìn)步，但是其復(fù)發(fā)、浸潤、轉(zhuǎn)移的機(jī)制尚不明確。大量研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)化生

2、長因子β1（Transforminggrowthfactorbeta1，TGFβ1）和Toll樣受體4（Toll-likereceptor4，TLR4）信號通路與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移過程密切相關(guān)，且有文獻(xiàn)報(bào)道，在一些腫瘤細(xì)胞表面存在TLR4的表達(dá)，并且其激活可以上調(diào)TGFβ1細(xì)胞因子的表達(dá)，猜想TGFβ1和TLR4在腫瘤中可能存在關(guān)聯(lián)，而目前有關(guān)兩者間相互作用的報(bào)道甚少，本研究旨在探索與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的TGFβ1與TLR4信號通路，

3、在膀胱移行細(xì)胞癌T24細(xì)胞中的表達(dá)及兩者之間的相互作用。
　　目的：
　　研究TGFβ1和TLR4信號通路在膀胱移行細(xì)胞癌T24細(xì)胞中的表達(dá)及相互作用，從而為膀胱移行細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展機(jī)制的研究提供新思路。
　　方法：
　　1.采用RT-PCR方法檢測T24細(xì)胞分別在LPS（脂多糖）、rhTGFβ1（重組人源轉(zhuǎn)化生長因子β1）刺激前后TLR4在mRNA水平的表達(dá)量變化。
　　2.采用流式細(xì)胞術(shù)檢測T24細(xì)胞分別

4、在LPS、rhTGFβ1刺激前后TLR4在蛋白水平的表達(dá)量變化。
　　3.采用RT-PCR方法檢測T24細(xì)胞在LPS刺激前后TGFβ1在mRNA水平的表達(dá)量變化。
　　4.采用ELISA方法檢測T24細(xì)胞在LPS刺激前后TGFβ1在蛋白水平的表達(dá)量變化。
　　結(jié)果：
　　1.在mRNA水平和蛋白質(zhì)水平均檢測到TLR4和細(xì)胞因子TGFβ1在T24細(xì)胞的表達(dá)。
　　2.三種不同濃度LPS（1μg/ml、5μg/

5、ml、10μg/ml）刺激T24細(xì)胞12h后，TLR4mRNA相對表達(dá)量隨著LPS濃度的升高而升高，組間相對表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=12.26，P=0.007）；與對照組相比，當(dāng)LPS濃度為1μg/ml時(shí)即出現(xiàn)升高趨勢，在10μg/ml時(shí)作用效果達(dá)到最強(qiáng)（P<0.001）。選用10μg/mlLPS刺激T24細(xì)胞不同時(shí)間之后，TLR4mRNA相對表達(dá)量出現(xiàn)差異（χ2=13.78，P=0.02），并且在12h時(shí)達(dá)到最高（P<0.001

6、）。在蛋白質(zhì)水平，流式細(xì)胞術(shù)檢測到LPS刺激后T24細(xì)胞膜表面TLR4蛋白表達(dá)升高，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=﹣3.93，P=0.02）。
　　3.三種不同濃度LPS（1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml）刺激T24細(xì)胞12h后，TGFβ1mRNA相對表達(dá)量隨著LPS濃度的升高而升高，組間相對表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=9.28，P=0.03）；與對照組相比，當(dāng)LPS濃度為5μg/ml時(shí)，其升高開始具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.04

7、），在10μg/ml時(shí)作用效果最為明顯（P=0.003）。選用10μg/mlLPS刺激T24細(xì)胞不同時(shí)間之后，TGFβ1mRNA相對表達(dá)量出現(xiàn)差異（χ2=15.12，P=0.01），并且在12h時(shí)達(dá)到最高（P<0.001）。在蛋白質(zhì)水平，ELISA方法同樣檢測到LPS刺激后細(xì)胞因子TGFβ1蛋白表達(dá)升高，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=﹣2.47，P=0.03）。
　　4．三種不同濃度rhTGFβ1（1ng/ml、5ng/ml、10ng/m

8、l）作用于T24細(xì)胞12h后，TLR4在mRNA水平有升高趨勢，并且在5ng/ml時(shí)達(dá)到最高，但并不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=3.88，P=0.28）。之后選用5ng/mlrhTGFβ1刺激T24細(xì)胞不同時(shí)間之后，同樣mRNA相對表達(dá)量變化并沒有因?yàn)闀r(shí)間的變化而出現(xiàn)差異（χ2=9.69，P=0.08）。但在蛋白質(zhì)水平，用5ng/mlrhTGFβ1刺激T24細(xì)胞24h后，流式細(xì)胞術(shù)檢測到細(xì)胞膜表面TLR4蛋白表達(dá)明顯升高，并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t