臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞兩種分離工藝的比較及對(duì)臍血來源CD4+T細(xì)胞免疫調(diào)控的研究.pdf

1、臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞是一類具有自我更新和多向分化潛能的成體干細(xì)胞，具有免疫調(diào)節(jié)、造血支持和組織修復(fù)等功能，其分離方法和免疫功能的研究對(duì)自身免疫性疾病和移植物抗宿主病的臨床治療具有重要意義。本研究工作主要包括三部分內(nèi)容。
　　首先，比較臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞兩種分離工藝，分辨優(yōu)劣。通過酶消化法與組織爬片法從臍帶中分離和培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)表面標(biāo)志、繪制細(xì)胞生長曲線及分別向成骨誘導(dǎo)鑒定多向分化潛能。
　

2、　研究顯示兩種方法均能有效分離純化臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，表面標(biāo)志與成骨分化能力沒有顯著差異，但是組織爬片法在成功率、細(xì)胞增殖能力及實(shí)驗(yàn)成本等方面占有一定優(yōu)勢(shì)。結(jié)果表明，組織爬片法分離臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞更符合標(biāo)準(zhǔn)化及規(guī)?；囊螅蚨档猛茝V。
　　第二部分是研究臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)異源臍血CD4+T淋巴細(xì)胞增殖及分化的免疫調(diào)控作用。按不同比例建立臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞與PHA活化的臍血CD4+T淋巴細(xì)胞直接接觸與Transwell共培養(yǎng)體系，

3、血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測(cè)CD4+T淋巴細(xì)胞增殖情況、流式檢測(cè)CD4+CD25+/CD4+比率變化及熒光定量PCR檢測(cè)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞標(biāo)志基因Foxp3相對(duì)表達(dá)量的變化。
　　研究表明臍帶MSCs明顯抑制了PHA活化的臍血CD4+T淋巴細(xì)胞的增殖，提高了CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在CD4+T淋巴細(xì)胞中的比率及基因Foxp3的相對(duì)表達(dá)量。以上這些效應(yīng)均與臍帶MSCs的數(shù)量呈正相關(guān)，且直接接觸共培養(yǎng)效應(yīng)強(qiáng)于Transwell共培養(yǎng)。臍帶MSCs

4、抑制PHA活化的臍血CD4+T淋巴細(xì)胞的增殖，能夠改變調(diào)節(jié)性T細(xì)胞亞群的比率。表明臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)臍血CD4+T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)具有負(fù)調(diào)節(jié)作用。
　　最后部分是研究臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)異源臍血CD4+T淋巴細(xì)胞凋亡的調(diào)控作用。建立臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞與地塞米松刺激的臍血CD4+T淋巴細(xì)胞直接接觸與Transwell共培養(yǎng)體系，流式檢測(cè)CD4+T淋巴細(xì)胞凋亡情況。
　　研究顯示臍帶MSCs明顯抑制了地塞米松誘導(dǎo)的臍血CD4+T淋