版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、背景:伴皮質(zhì)下梗死及白質(zhì)腦病的常染色體顯性遺傳性腦動(dòng)脈血管病變(CADASIL)是由Notch3基因突變引起的遺傳性血管性癡呆疾病。CADASIL的典型病理特點(diǎn)是血管壁中血管平滑肌細(xì)胞顯著的進(jìn)行性退化直至消失,并伴有Notch3胞外區(qū)及致密顆粒性嗜鋨物質(zhì)(GOM)堆積。遺傳連鎖分析已證實(shí)位于第19號(hào)染色體上的Notch3基因的突變是導(dǎo)致該病的原因,目前認(rèn)為這是一種功能獲得性突變,但是基因突變導(dǎo)致其具體獲得何種新的功能及其相關(guān)機(jī)制目前尚不
2、清楚。本實(shí)驗(yàn)就其可能獲得的新功能和相關(guān)機(jī)制在多種細(xì)胞系中進(jìn)行篩選和探討。
方法:本實(shí)驗(yàn)在人胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(HAVSMC)、人肺成纖維細(xì)胞(IMR-90)、鼠小膠質(zhì)細(xì)胞(BV2)、人宮頸癌細(xì)胞(HeLa)、人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7和HCC1937)上進(jìn)行相關(guān)研究。首先我們用重組PCR的方法構(gòu)建Notch3的CADASIL突變體R90C和R169C的真核表達(dá)載體,然后用脂質(zhì)體(Lipofectamine2000)轉(zhuǎn)染的方法將野
3、生型(WT) Notch3及突變體R90C和R169C轉(zhuǎn)染到以上細(xì)胞中。用蛋白免疫印跡(Western blot)方法研究胞外基質(zhì)蛋白collagen和fibronectin及DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1(DNMT1)的表達(dá)情況;用RT-PCR的方法檢測(cè)炎癥因子TNF-α和IL-1β基因的mRNA水平的變化情況,用Griess法檢測(cè)NO水平的變化情況;分別用劃線法和細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞遷移和增殖情況。所有數(shù)據(jù)分析采用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,P<0.05具有
4、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié)果:首先,用重組PCR的方法,我們成功構(gòu)建Notch3的CADASIL突變體R90C和R169C的真核表達(dá)載體;然后將突變體轉(zhuǎn)染到HAVSMC細(xì)胞中,發(fā)現(xiàn)胞外基質(zhì)蛋白collagen和fibronectin的表達(dá)有明顯上升,這與CADASIL的病理特征是相符合的,但在IMR-90細(xì)胞中胞外基質(zhì)蛋白collagen和fibronectin的表達(dá)有明顯下降;在BV2細(xì)胞中,我們發(fā)現(xiàn)突變體可以降低炎癥因子NO水平,但
5、對(duì)TNF-α和IL-1β基因的mRNA水平?jīng)]有影響;在HeLa細(xì)胞中我們發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的遷移和增殖都有明顯的上升,但在MCF-7和HCC1937細(xì)胞中卻得出了與HeLa細(xì)胞相反的結(jié)果;在HeLa和IMR-90細(xì)胞中,突變體可以抑制DNMT1的表達(dá),而野生型Notch3卻無(wú)此調(diào)控作用。
結(jié)論:1、CADASIL突變體和野生型Notch3對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白collagen和fibronectin的表達(dá),在HAVSMC和IMR-90細(xì)胞中有
6、不同的調(diào)控作用;2、CADASIL突變體和野生型Notch3均可影響B(tài)V2細(xì)胞NO的釋放水平;3、CADASIL突變體和野生型Notch3對(duì)腫瘤細(xì)胞遷移和增殖有不同的調(diào)控作用,且這種差異調(diào)控與腫瘤細(xì)胞種類有關(guān)。4、CADASIL突變體可以抑制HeLa和IMR-90細(xì)胞DNMT1的表達(dá),而野生型Notch3卻無(wú)此調(diào)控作用。
總的來說,我們發(fā)現(xiàn)Notch3突變體在不同的細(xì)胞系中呈現(xiàn)出不同的調(diào)控作用,提示Notch3突變體可能具有較
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- CADASIL的臨床特點(diǎn)和NOTCH3基因突變研究.pdf
- 三個(gè)CADASIL家系NOTCH3基因突變檢測(cè)的研究.pdf
- Notch3基因N端序列的缺失突變以及CADASIL相關(guān)的錯(cuò)義突變對(duì)其相關(guān)生物學(xué)特性的影響.pdf
- NOTCH3蛋白及GOM對(duì)CADASIL發(fā)病機(jī)制作用的研究.pdf
- 擬南芥功能獲得突變體sef的研究.pdf
- 13037.希金斯刺盤孢tdna插入突變體庫(kù)致病基因篩選及相關(guān)突變體基因的功能研究
- 家蠶縮蠶突變體突變基因的功能研究.pdf
- 豬myostatin基因不同突變體的功能研究.pdf
- 鹽芥突變體庫(kù)的構(gòu)建及突變體的篩選.pdf
- 人sBLyS突變體的構(gòu)建及功能研究.pdf
- 水稻“9311”突變體的篩選和突變體庫(kù)的構(gòu)建.pdf
- SM22α及其缺失突變體的重組表達(dá)和功能研究.pdf
- 藍(lán)藻NdhK亞基突變體的構(gòu)建及其生理功能研究.pdf
- 煙草航天育種突變體T-cldf及其相關(guān)ESTs的研究.pdf
- 家蠶吡哆醛激酶基因定點(diǎn)突變及突變體功能研究.pdf
- 人cubilin蛋白突變體的構(gòu)建與功能研究.pdf
- CUEDC2各種缺失突變體的構(gòu)建及其功能初探.pdf
- 用于藥物篩選的mGluR2突變體和用于失敏機(jī)制研究的mGluR5突變體的構(gòu)建及其功能檢測(cè).pdf
- 鐵結(jié)合蛋白及其突變體的表達(dá)、純化、結(jié)構(gòu)和功能研究.pdf
- TET蛋白突變體的制備及其性質(zhì)的研究.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論