乏氧誘導(dǎo)因子-1α抑制劑鹽酸小檗堿和蜂毒肽對(duì)乏氧腫瘤細(xì)胞放射敏感性的影響及機(jī)制研究.pdf

1、本文從以下幾部分進(jìn)行論述：
　　第一部分:乏氧誘導(dǎo)因子-1α抑制劑鹽酸小檗堿對(duì)乏氧食管鱗癌細(xì)胞放射敏感性的影響及其機(jī)制研究
　　目的:觀察鹽酸小檗堿對(duì)乏氧食管鱗癌細(xì)胞乏氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia induciblefactor-1α，HIF-1α)及其下游靶基因血管內(nèi)皮生成因子(vascμ lar endothelialgrowth factor，VEGF)的作用，體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究鹽酸小檗堿對(duì)多個(gè)乏氧食管鱗癌放射敏感性的

2、影響，探討鹽酸小檗堿增加放射線對(duì)乏氧食管鱗癌的敏感性機(jī)制。
　　方法:選用2種食管鱗癌細(xì)胞株ECA109、TE13，研究梯度濃度及不同時(shí)間點(diǎn)下鹽酸小檗堿處理腫瘤細(xì)胞，采用四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT法)觀察鹽酸小檗堿對(duì)食管鱗癌細(xì)胞作用;采用免疫熒光技術(shù)觀察乏氧前后ECA109細(xì)胞HIF-1α表達(dá)情況，并觀察高低濃度鹽酸小檗堿作用后HIF-1α表達(dá);應(yīng)用蛋白免疫印跡法(Western-blot)測(cè)定高低濃度鹽酸小檗堿處理后細(xì)胞HIF

3、-1α、VEGF表達(dá)變化;分別給予常氧細(xì)胞、乏氧細(xì)胞、乏氧細(xì)胞聯(lián)合不同濃度下鹽酸小檗堿、順鉑陽(yáng)性參照組6MV-X線照射處理后，平板克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察鹽酸小檗堿對(duì)乏氧食管鱗癌放射敏感性的影響;采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)AnnexinⅤ-PI雙染色后各組細(xì)胞凋亡率;構(gòu)建裸鼠食管鱗癌ECA109移植瘤模型，設(shè)立對(duì)照組、單純照射組、腹腔注射鹽酸小檗堿組、腹腔注射鹽酸小檗堿聯(lián)合照射組，予照射組皮下移植瘤8Gy單次大劑量放療，放療14天后處死裸鼠，測(cè)量腫瘤體

4、積，免疫組化法檢測(cè)腫瘤內(nèi)HIF-1α、VEGF表達(dá)情況。
　　結(jié)果:鹽酸小檗堿抑制食管鱗癌細(xì)胞ECA109和TE13的生長(zhǎng)，具有時(shí)間以及劑量依賴性;通過(guò)單擊多靶模型擬合曲線，可見不同濃度的鹽酸小檗堿預(yù)處理乏氧食管鱗癌細(xì)胞24小時(shí)后，與照射組相比，增加乏氧食管鱗癌細(xì)胞的輻射損傷，鹽酸小檗堿作用乏氧細(xì)胞照射組的細(xì)胞凋亡率增加，且成劑量依賴性;鹽酸小檗堿作用于乏氧食管癌細(xì)胞時(shí)，可以使乏氧相關(guān)蛋白HIF-1α、VEGF的表達(dá)降低，并且呈現(xiàn)

5、量效關(guān)系，且減少ECA109細(xì)胞內(nèi)核內(nèi)HIF-1α表達(dá);鹽酸小檗堿可顯著抑制放療后ECA109細(xì)胞移植瘤模型裸鼠皮下腫瘤生長(zhǎng)，免疫組化顯示鹽酸小檗堿可降低移植瘤內(nèi)HIF-1α、VEGF表達(dá)。
　　結(jié)論:鹽酸小檗堿降低乏氧食管鱗癌細(xì)胞HIF-1α及VEGF表達(dá)，增加乏氧食管鱗癌細(xì)胞放射敏感性;抑制食管鱗癌裸鼠移植瘤放療后腫瘤組織生長(zhǎng)。
　　第二部分:乏氧誘導(dǎo)因子-1α抑制劑蜂毒肽對(duì)乏氧鼻咽癌細(xì)胞CNE-2放射敏感性的影響及其機(jī)

6、制研究
　　目的:觀察蜂毒肽對(duì)乏氧鼻咽癌細(xì)胞CNE-2乏氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia induciblefactor-1α，HIF-1α)及其下游靶基因血管內(nèi)皮生成因子(vascμ lar endothelialgrowth factor，VEGF)的抑制情況，研究蜂毒肽對(duì)CNE-2細(xì)胞株放射敏感性的影響，探討蜂毒肽增加乏氧鼻咽癌細(xì)胞放射敏感性的機(jī)制。
　　方法:選用鼻咽癌細(xì)胞CNE-2進(jìn)行研究，梯度濃度及不同時(shí)間點(diǎn)蜂毒

7、肽處理腫瘤細(xì)胞后，采用CCK8法觀察蜂毒肽對(duì)CNE-2細(xì)胞增殖能力的影響。應(yīng)用蛋白免疫印跡法(Western-blot)測(cè)定不同濃度蜂毒肽處理后CNE-2細(xì)胞內(nèi)HIF-1α、VEGF表達(dá)變化;分別給予常氧細(xì)胞、乏氧細(xì)胞，乏氧細(xì)胞聯(lián)合蜂毒肽、常氧細(xì)胞聯(lián)合蜂毒肽6MV-X線照射處理后，平板克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察蜂毒肽對(duì)乏氧CNE-2細(xì)胞放射敏感性的影響;AnnexinⅤ-PI雙染色后采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率;構(gòu)建裸鼠CNE-2移植瘤模型，

8、設(shè)立對(duì)照組、單純照射組、腹腔注射蜂毒肽組、腹腔注射蜂毒肽聯(lián)合照射組，予照射組皮下移植瘤6Gy單次大劑量放療，放療14天后處死裸鼠，對(duì)移植瘤拍照并測(cè)量腫瘤體積。
　　結(jié)果:蜂毒肽抑制CNE-2細(xì)胞生長(zhǎng)，具有時(shí)間以及劑量依賴性;通過(guò)單擊多靶模型擬合曲線，可見蜂毒肽對(duì)常氧和乏氧鼻咽癌細(xì)胞均有增敏作用，且在乏氧組增敏效果更為明顯。相比于常氧細(xì)胞照射組，可以顯著增加常氧CNE-2細(xì)胞的輻射敏感性，而蜂毒肽對(duì)乏氧CNE-2細(xì)胞照射組中的細(xì)胞凋

9、亡率增加更為明顯。蜂毒肽作用于乏氧CNE-2細(xì)胞，誘導(dǎo)乏氧相關(guān)蛋白HIF-1α、VEGF的表達(dá)降低，呈現(xiàn)量效關(guān)系。蜂毒肽抑制放療后CNE-2細(xì)胞移植瘤模型裸鼠皮下腫瘤生長(zhǎng)。
　　結(jié)論:蜂毒肽抑制乏氧鼻咽癌細(xì)胞CNE-2內(nèi)HIF-1α及其VEGF的表達(dá)，增加乏氧和常氧下CNE-2細(xì)胞放射敏感性;同時(shí)抑制鼻咽癌裸鼠移植瘤放療后腫瘤組織生長(zhǎng)。蜂毒肽對(duì)增加常氧和乏氧情況下鼻咽癌細(xì)胞的放療敏感性，且對(duì)乏氧細(xì)胞作用更為明顯，這一現(xiàn)象可能與HI