人嗜中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶通過腫瘤壞死因子-α轉(zhuǎn)化酶-表皮生長因子受體信號通路誘導(dǎo)慢性鼻-鼻竇炎高分泌的研究.pdf

1、目的：利用人嗜中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶（HNE）刺激小鼠鼻腔黏膜，建立鼻腔高分泌模型，探索腫瘤壞死因子-α轉(zhuǎn)化酶（TACE）-表皮生長因子受體（EGFR）信號通路在體內(nèi)黏蛋白MUC5AC高分泌中的作用研究。
　　方法：1.選取6周雌性C57BL/6小鼠隨機(jī)分成對照組和HNE組。采用HNE滴鼻方法建立小鼠鼻腔高分泌模型，在最后一次滴鼻后取小鼠鼻腔固定，通過HE及PAS染色觀察每組鼻黏膜的病理改變情況。2.模型建立成功后，以TACE抑制劑

2、(TAPI-2)及EGFR抑制劑（AG1478）為干預(yù)因素，取鼻黏膜行HE及PAS染色觀察每組鼻黏膜的病理變化，TACE、EGFR和MUC5AC在黏膜上皮層中的分布情況是利用免疫組化的方法檢測，采用蛋白印跡（WesternBlot）法檢測小鼠鼻黏膜中p-EGFR、EGFR、TACE蛋白表達(dá)情況，各組鼻黏膜中MUC5AC蛋白的變化通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）來檢測，實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測TACE、EGFR和MUC5

3、ACmRNA的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1.成功建立了HNE誘導(dǎo)下小鼠鼻腔高分泌模型。HE染色結(jié)果顯示，HNE組可見黏膜上皮排列不整齊，杯狀細(xì)胞及黏膜下腺體增生，大量炎性細(xì)胞浸潤；對照組則見黏膜上皮排列規(guī)則，可見少量杯狀細(xì)胞，黏膜下腺體未見增生。HNE組鼻黏膜上皮層及黏膜下腺體PAS染色可見紫紅色的強(qiáng)陽性染色顆粒，對照組見弱陽性表達(dá)。2.在TAPI-2及AG1478的干預(yù)下，與HNE組相比，HE染色見小鼠鼻黏膜杯狀細(xì)胞及腺體增生不明顯

4、，上皮排列較整齊；PAS染色見黏膜下腺體中紫紅色染色明顯減少。免疫組化法檢測小鼠鼻黏膜組織中MUC5AC表達(dá)在黏膜上皮層的杯狀細(xì)胞及黏膜下腺體中，TACE和EGFR主要表達(dá)于黏膜上皮層中，結(jié)果顯示MUC5AC、TACE和EGFR在HNE組中表達(dá)均明顯高于對照組（P＜0.05）；在HNE+TAPI-2組中以上各指標(biāo)與HNE組相比均下調(diào)（P＜0.05）；而HNE+AG1478組中TACE的表達(dá)與HNE組相近（P＞0.05），EGFR和MUC

5、5AC的表達(dá)均明顯下調(diào)（P＜0.05）。蛋白印跡法見HNE組中TACE、EGFR和P-EGFR蛋白的表達(dá)明顯高于對照組（P＜0.01）；HNE+TAPI-2組中以上三個(gè)指標(biāo)的表達(dá)與HNE組相比均明顯下調(diào)（P＜0.01）；而在HNE+AG1478組中TACE蛋白的表達(dá)情況與HNE組相比無明顯變化（P＞0.05），EGFR和P-EGFR蛋白的表達(dá)情況與HNE組相比均明顯下調(diào)（P＜0.01）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)結(jié)果表明HNE組MUC5AC蛋白表達(dá)

6、量較對照組顯著升高（P＜0.01），HNE+TAPI-2組和HNE+AG1478組的表達(dá)與HNE組相比明顯下調(diào)（P＜0.01）。熒光定量PCR結(jié)果顯示HNE組鼻黏膜組織中TACE、EGFR和MUC5ACmRNA的表達(dá)量與對照組相比均增加（P＜0.01）；與HNE組相比，HNE+TAPI-2組中各指標(biāo)mRNA的表達(dá)量均下調(diào)（P＜0.01）；而HNE+AG1478組中TACEmRNA的表達(dá)量與HNE組比較無明顯變化（P＞0.05），EGFR