致病桿菌中SrfABC類毒素生物活性研究.pdf

1、分類號Q窆三窆：窆學(xué)校代碼!Q主壘2密級學(xué)號2Q12Q21壘!123致病桿菌中SrfABC類毒素生物活性研究BiologicalactivitystudyofSrfABCtoxinfromXenorhabdus指導(dǎo)教師姓名、職稱塑照插型鏨撞湖南師范大學(xué)學(xué)位評定委員會辦公室二。一五年五月接下來，我ff]PCR擴增YsrfABC全長基因并在Ecoli中異源表達，提取全蛋白進行細胞毒性測定，實驗結(jié)果證實：表達了SrfABC毒素的菌體全蛋白對C

2、F203／25具有很高的細胞毒性。激光共聚焦顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)：低濃度下，SrfABC毒素處理后的CF203／25細胞中有完整的細胞骨架，但細胞核皺縮、線粒體消失；而高濃度下，毒素處理后的細胞核凝聚，細胞骨架解聚，線粒體消失。綜合以上實驗結(jié)果，我們推測：Sr￡蛆C毒素可能作用靶點為細胞的線粒體。DNALadder實驗發(fā)現(xiàn)：與對照組相比，經(jīng)SrfABC毒素處理的實驗組中的DNA出現(xiàn)了成倍降解條帶，暗示該毒素可能引起細胞凋亡，具體機制有待進一

3、步研究和證實。本研究還構(gòu)建了SrfA，Sr毋，SrfC三組分單獨表達載體。經(jīng)IPTG誘導(dǎo)、純化、脫鹽后的三種目的蛋白分別作用CF203／25細胞，其中SrfA單獨作用時，在低濃度下就具有很高的細胞毒性，而Srfl3和SrfC組分只有在高濃度下才能抑制細胞增殖，我們推測：SrfA組分是毒素復(fù)合物中的酶活性組分，而SrfB和SrfC是輔助組分。本研究為進一步研究SrfABC毒素的作用機制，明確SrfABC毒素在致病桿菌菌株中抵抗宿主防御、發(fā)