基于TLR9-AP-1信號通路探討益氣祛風(fēng)、宣痹化飲方治療過敏性鼻炎-哮喘綜合征的作用機(jī)制.pdf

1、研究目的:
　　探索益氣祛風(fēng)、宣痹化飲方能否通過干預(yù)TLR9/AP-1信號通路中AP-1的含量及其下游白細(xì)胞介素因子來達(dá)到治療過敏性鼻炎-哮喘綜合征的作用機(jī)制。
　　研究方法:
　　采用“雞卵清白蛋白(OVA)聯(lián)合氫氧化鋁凝膠腹腔注射+OVA霧化吸入激發(fā)”和“OVA滴鼻法”的形式建立豚鼠過敏性鼻炎-哮喘綜合征模型，隨機(jī)分為藥物干預(yù)組4組和模型組，并設(shè)立空白對照組。藥物干預(yù)組中，益氣祛風(fēng)、宣痹化飲方分為高劑量組、中劑量組

2、、低劑量組，西藥組用地塞米松進(jìn)行干預(yù)，干預(yù)2周后，處死豚鼠，留取豚鼠血清、肺組織及鼻粘膜組織和支氣管肺泡灌洗液以檢測:1、肺組織和鼻粘膜組織HE染色切片;2、運(yùn)用Giemsa染色觀察肺組織及支氣管肺泡灌洗液中嗜酸性粒細(xì)胞浸潤情況;3、Western Blotting檢測肺組織勻漿液C-Jun、C-Fos、IL-4、IL-5、IL-13的表達(dá);4、PCR檢測C-Jun、C-Fos的基因表達(dá)情況;5、Elisa法檢測血清中IL-4、IL-5

3、、IL-13的含量。
　　研究結(jié)果:
　　3.1 HE染色
　　鼻粘膜:模型組可見上皮細(xì)胞破壞變性，纖毛壞死脫落，黏膜下層可見炎細(xì)胞浸潤;中藥高劑量組、中劑量組、低劑量組及地塞米松組可見鼻粘膜上皮細(xì)胞及纖毛不同程度被破壞及脫落?？瞻讓φ战M，上皮細(xì)胞及纖毛良好，未見明顯炎細(xì)胞浸潤。
　　肺組織:模型組可見支氣管肺泡破壞，支氣管壁明顯增厚，并伴有滲出，支氣管黏膜下層和肌層、肺間質(zhì)可見大量嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等炎細(xì)胞

4、浸潤;中藥高劑量組、中劑量組、低劑量組及地塞米松組肺組織可見不同程度的支氣管壁增厚及滲出，支氣管黏膜下層和肌層、肺間質(zhì)可見不同程度的嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等炎細(xì)胞浸潤。
　　3.2 Giemsa染色
　　BALF:模型組可見大量嗜酸性粒細(xì)胞浸潤，中藥高劑量組、中劑量組、低劑量組及地塞米松組肺組織可見不同程度的嗜酸性粒細(xì)胞浸潤。模型組可見大量嗜酸性粒細(xì)胞;中藥高劑量組、中劑量組、低劑量組及地塞米松組肺組織可見不同程度的嗜酸性粒

5、細(xì)胞存在?？瞻捉M肺組織及支氣管肺泡灌洗未見明顯異常。
　　3.3 ELISA檢測IL-4、IL-5、II-13
　　IL-4:藥物干預(yù)組與模型組比有明顯差異(P＜0.01);中藥低劑量組與地塞米松組比較存在差異(P＜0.05)，而中藥三組之間未見差異(P＞0.05);中藥中劑量組與中藥高劑量組和地塞米松組比較未見差異(P＞0.05)。IL-5:藥物干預(yù)組與模型組比均明顯差異(P＜0.01);中藥低劑量組與地塞米松組比較存在差

6、異(P＜0.05)，而中藥三組之間未見差異(P＞0.05);中藥中劑量組與中藥高劑量組和地塞米松組比較未見差異(P＞0.05)。IL-13:四組治療組與模型組比起來均有明顯差異(P＜0.01)，而在治療組四組比較中，中藥低劑量組與其余三組存在差異，其中與中藥中劑量組比較存在差異(P＜0.05)，與中藥高劑量組和地塞米松組比較存在明顯差異(P＜0.01);中藥中劑量組與中藥高劑量組比較無明顯差異(P＞0.05)，而與地塞米松組比較存在明顯

7、差異(P＜0.01);中藥高劑量組和地塞米松組比較無差異。
　　3.4 Western Blotting檢測C-Jun、C-Fos、IL-4、IL-5、IL-13
　　在C-Fos、C-Fos組中，藥物干預(yù)組較模型組存在顯著差異(P＜0.01);地塞米松組與中藥高、中、低三組之間比較均未見明顯差異。在IL-4組中，中藥低劑量組與模型組之間未見明顯差異;模型組與中藥高劑量組、中藥高劑量組與地塞米松組存在有顯著差異(P＜0.01

8、);中藥高劑量組與中藥中劑量組、地塞米松組未見明顯差異(P＞0.05)。在IL-5組中，地塞米松組與中藥高劑量組之間未見明顯差異(P＞0.05);與中藥中劑量、低劑量組有顯著差異(P＜0.01);中藥中劑量組、低劑量組兩者未見差異(P＞0.05);與中藥高劑量組有顯著差異(P＜0.01);中藥低劑量組與中藥高劑量組存在顯著差異(P＜0.01)。在IL-13組中，模型組與藥物治療四組有顯著差異(P＜0.01);中藥低劑量組與中藥中劑量組存

9、在差異(P＜0.05)，與中藥高劑量組及地塞米松組存在顯著差異(P＜0.01);中藥中劑量組與中藥高劑量組及地塞米松組未見明顯差異(P＞0.05)。
　　3.5 PCR檢測C-Jun、C-Fos基因表達(dá)
　　C-Fos組中，中藥組及地塞米松組與模型組均有明顯差異(P＜0.01)。中藥低劑量組與中藥高劑量組、中藥中劑量組及地塞米松組存在差異(P＜0.05);中藥中劑量組、中藥高劑量組及地塞米松組無明顯差異。
　　C-Ju

10、n組中，中藥組及地塞米松組與模型組均有明顯差異(P＜0.01)。中藥低劑量組與中藥高劑量組及地塞米松組存在明顯差異(P＜0.01);與中藥中劑量組未見明顯差異;中藥中劑量組與中藥高劑量組未見明顯差異，與地塞米松組存在明顯差異(P＜0.01);中藥高劑量組與地塞米松組未見差異。
　　研究結(jié)論:
　　益氣祛風(fēng)、宣痹化飲方能夠抑制AP-1構(gòu)成因子即C-Jun、C-Fos的基因表達(dá)，抑制AP-1的總量，進(jìn)而進(jìn)一步抑制AP-1下游的I