2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  研究蛋白酶活化受體1(protein activated receptor1)PAR1在熱打擊引起血管內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical venous endothelial cells,HUVECs)炎癥激活中的作用,闡明PAR1在重癥中暑小鼠全身炎癥反應(yīng)中的作用。
  方法:
  1.構(gòu)建體外HUVECs熱打擊模型,采用RT-PCR及ELISA方法分別檢測(cè)42℃熱打擊HUVECs2 h后不同時(shí)間段

2、TNF-α、IL-6、ICAM-1的mRNA和蛋白表達(dá)水平;
  2.采用熒光顯微鏡觀察單核細(xì)胞對(duì)熱打擊HUVECs后粘附的影響;
  3.采用western blot及RT-PCR方法分別檢測(cè)熱打擊HUVECs后不同時(shí)間段PAR1蛋白及mRNA的表達(dá)水平;
  4.采用PAR1 siRNA及腺病毒過表達(dá)預(yù)處理HUVECs,檢測(cè)37℃及42℃熱打擊后8h PAR1的表達(dá);
  5.采用RT-PCR檢測(cè)PAR1抑制

3、劑、激動(dòng)劑、siRNA、PAR1腺病毒過表達(dá)對(duì)熱打擊HUVECs8 h后TNF-α、IL-6、ICAM-1的mRNA表達(dá)水平的影響;
  6.采用ELISA檢測(cè)PAR1抑制劑、激動(dòng)劑、siRNA、PAR1腺病毒過表達(dá)對(duì)熱打擊HUVECs8 h后細(xì)胞上清液中的TNF-α、IL-6、ICAM-1表達(dá)水平的影響;
  7.采用熒光顯微鏡觀察PAR1抑制劑、激動(dòng)劑、siRNA、PAR1腺病毒過表達(dá)對(duì)熱打擊HUVECs8 h后對(duì)單核細(xì)

4、胞粘附的影響;
  8.構(gòu)建小鼠中暑模型,免疫組化檢測(cè)心、肝、肺和小腸上PAR1蛋白的表達(dá);
  9.采用ELISA檢測(cè)正常小鼠及重癥中暑、PAR1抑制劑、激動(dòng)劑對(duì)重癥中暑小鼠6h后血清中TNF-α、IL-6、ICAM-1的表達(dá)水平;
  10.采用H&E染色檢測(cè)PAR1抑制劑、激動(dòng)劑對(duì)重癥中暑小鼠的臟器損傷的影響;
  11.觀察PAR1抑制劑、激動(dòng)劑對(duì)重癥中暑小鼠的生存率的影響。
  結(jié)果:
  

5、1.熱打擊使HUVECs TNF-α、IL-6、ICAM-1 mRNA表達(dá)增加(圖1.1,表1.1);
  2.熱打擊使HUVECs炎癥因子TNF-α/IL-6和粘附因子ICAM-1蛋白分泌增加(表1.2);
  3.熱打擊使單核細(xì)胞對(duì)HUVECs粘附增加(圖2,表2);
  4.熱打擊使HUVECs的PAR1 mRNA和蛋白表達(dá)增加(圖3,表3);
  5.PAR1 siRNA能有效降低熱打擊后PAR1的表達(dá)/

6、AdPAR1有效增加熱打擊后PAR1的表達(dá)(圖4,表4);
  6.抑制或敲低PAR1可降低細(xì)胞因子TNF-α/IL-6和粘附因子ICAM-1 mRNA表達(dá),而激活或過表達(dá)則可增加上述基因(圖5.1,5.2,表5.1,5.2);
  7.抑制或敲低PAR1可降低細(xì)胞因子TNF-α/IL-6和粘附因子ICAM-1蛋白分泌,而激活或過表達(dá)則可增加上述蛋白分泌(表5.3,5.4);
  8.抑制PAR1可減少單核細(xì)胞對(duì)HUV

7、ECs的粘附,而激活PAR1則增強(qiáng)這種粘附(圖6.1,表6.1);
  9.敲除PAR1可減少單核細(xì)胞對(duì)HUVECs的粘附,而PAR1過表達(dá)則增強(qiáng)這種粘附(圖6.2,表6.2);
  10.PAR1蛋白在重癥中暑小鼠心、肝、肺和小腸表達(dá)增加(圖7);
  11.抑制PAR1可降低重癥中暑小鼠血清TNF-α、IL-6和ICAM-1水平,而激活PAR1則增加上述蛋白水平(表7);
  12.抑制PAR1可減輕重癥中暑

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