組蛋白修飾參與化學(xué)致癌劑MNNG和MNU誘發(fā)人胃粘膜上皮細胞惡性轉(zhuǎn)化的機制研究.pdf

1、單功能烷化劑N-甲基-N'-硝基-N-亞硝基胍(MNNG)和N-甲基-N-亞硝基脲(MNU)是實驗室普遍使用的模式化學(xué)誘變劑，用于研究環(huán)境中廣泛存在的N-亞硝基化合物(NOC)的致癌機制。我們實驗室利用低劑量的MNNG和MNU多次、反復(fù)處理人胃粘膜上皮細胞GES-1，建立了化學(xué)致癌物誘導(dǎo)的細胞惡性轉(zhuǎn)化模型。為研究表觀遺傳修飾參與細胞惡性轉(zhuǎn)化的機制，我們對組蛋白H3和H4的主要修飾位點進行了差異分析。結(jié)果顯示惡性轉(zhuǎn)化細胞中以H3S10p和

2、H3S28p為代表的H3磷酸化水平發(fā)生明顯上調(diào)，而以H4K16ac為代表的H4乙?；絽s顯著降低。我們的進一步研究表明，引起H3S10p上調(diào)的主要上游激酶是MSK1，其激活僅部分依賴于ERK/MAPK信號通路，更主要的調(diào)控機制可能來源于其表達水平的顯著增高。同時，我們發(fā)現(xiàn)細胞惡性轉(zhuǎn)化后出現(xiàn)了MSK1/H3S10p通路下游靶基因c-fos，c-jun和jund的不同程度上調(diào)，提示組蛋白磷酸化異常可能參與細胞惡性轉(zhuǎn)化過程中重要基因的調(diào)控。

3、我們對組蛋白H4乙?；綇V泛下調(diào)的研究顯示:引起乙酰化下調(diào)的主要修飾酶是組蛋白去乙?；窰DAC1，其蛋白和mRNA水平以及酶活性在惡性轉(zhuǎn)化細胞中均發(fā)生上調(diào);抑制HDAC1的活性能顯著恢復(fù)H4K16的乙?；?。此外，我們還發(fā)現(xiàn)HDAC6的表達水平也發(fā)生了上調(diào)，其重要底物α-tubulin的乙?；浇档停种艸DAC6表達可逆轉(zhuǎn)α-tubulin的低乙?；?。進一步研究組蛋白乙?；惓？赡苡绊懙陌谢?，我們發(fā)現(xiàn)抑癌基因FHIT在致癌物

4、暴露后早期即發(fā)生顯著下調(diào)。深入研究表明:該基因不存在純合性缺失，其啟動子區(qū)H4乙?；矫黠@降低，而DNA甲基化水平卻顯著增高。我們的結(jié)果表明包括DNA甲基化和組蛋白修飾在內(nèi)的表觀遺傳機制參與了細胞惡性變過程中FHIT基因的表達調(diào)控。為進一步明確上述組蛋白修飾通路異常對惡性變細胞的影響，我們分別單獨或聯(lián)合使用MSK1抑制劑、HDAC抑制劑和DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑對惡性變細胞的惡性表型進行研究，發(fā)現(xiàn)逆轉(zhuǎn)表觀遺傳修飾改變可顯著抑制惡性表型。