鵜鶘的性別鑒定方法建立及其遺傳聚類分析.pdf

1、鵜鶘是我國二級保護動物，屬于單態(tài)性鳥類，即為雌雄同型，很難根據(jù)外表特征直接判定性別，在繁殖育種中時常發(fā)生錯配的現(xiàn)象，動物園鵜鶘的繁育效率較低。以保守基因 CHD鑒別鳥類性別的原理是 CHD有兩個同源拷貝 CHD-W和 CHD-Z，CHD-W和CHD-Z基因的外顯子大小相近，內(nèi)含子長度卻不同。因此利用PCR擴增反應(yīng)對其內(nèi)含子部分進行擴增來判斷鳥類性別。若PCR結(jié)果顯示一條帶，即為CHD-Z，可判斷為雄性個體，若顯示兩條帶，即為 CHD-Z

2、、CHD-W，可判斷為雌性。目前廣泛使用的PCR引物P2/P8、2550F/2718R在鵜鶘性別鑒定上不特異，因此本研究目的在于設(shè)計特異于鵜鶘性別鑒定的引物，以便穩(wěn)定、可靠地鑒定出鵜鶘性別，提高鵜鶘的繁殖效率。
　　本實驗利用2550F/2718R對鵜鶘的基因組擴增，經(jīng)回收測序得到鵜鶘的CHD基因片段序列，再用Chromos軟件、DNAstar軟件包以及NCBI中的Blast與ClustalW進行比較分析，設(shè)計出鵜鶘的特異性引物。

3、本實驗共設(shè)計出13對引物，其中的3對是CHD-Z基因特異引物，7對是CHD-W基因特異引物，3對是CHD基因特異引物。通過對鵜鶘個體性別的的驗證結(jié)果表明，引物組合 Z2/W3、Z3/W3的實驗準確率為100％、90.47%；引物T2、T3生物實驗準確率為95.23%、100%。另外，引物在DNA模板濃度為1ng/μL時，引物能夠依然有效。因此，本實驗所建立的研究方法特異性強、準確率高，可運用于鵜鶘的性別鑒定。
　　對本實驗中得到的