肝癌的CD44遺傳易感性、血清糖蛋白聚糖譜性別差異和DKK1標(biāo)志物的分析.pdf

1、第一部分糖蛋白CD44基因多態(tài)性與肝癌遺傳易感性研究
　　目的：CD44是一種分布極其廣泛，具有高度異質(zhì)性的單鏈跨膜糖蛋白粘附分子，在腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、侵襲、浸潤(rùn)以及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要的作用。本研究通過檢測(cè)CD44基因rs8193、rs10836347和 rs13347三個(gè)位點(diǎn)的基因型及等位基因頻率分布情況，探討CD44基因rs8193、rs10836347和rs13347三個(gè)位點(diǎn)的基因多態(tài)性與肝癌（HCC）患病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性。<

2、br>　　方法：本研究共納入204例肝癌患者和210例對(duì)照者，采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性技術(shù)及DNA直接測(cè)序法，檢測(cè)CD44基因rs8193、rs10836347和 rs13347三個(gè)位點(diǎn)的基因多態(tài)性。采用擬和優(yōu)度χ2檢驗(yàn)分析各SNP位點(diǎn)在肝癌組和對(duì)照組中基因型頻率的分布是否符合哈-溫平衡（HWE）。采用Binary logstic回歸通過校正性別、年齡、吸煙和飲酒四個(gè)影響因素計(jì)算比值比（OR）和95％可信區(qū)間（CI），對(duì)基

3、因多態(tài)性和肝癌的患病風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。
　　結(jié)果：
　　1. CD44基因三個(gè)SNP基因型頻率在肝癌組和對(duì)照組中的分布符合哈-溫平衡，P值均大于0.05，說明選擇的樣本具有群體代表性。
　　2.本研究發(fā)現(xiàn)rs8193位點(diǎn)共有CC、CT和TT三種基因型。以CC基因型為參考基因型，未發(fā)現(xiàn)CT和TT基因型與肝癌的患病風(fēng)險(xiǎn)有相關(guān)性。以C等位基因?yàn)閰⒖蓟?，T基因型與肝癌的患病風(fēng)險(xiǎn)無相關(guān)性。無論是在顯性模型還是隱性模型分析時(shí)，均

4、未發(fā)現(xiàn)有基因型與肝癌的患病風(fēng)險(xiǎn)有相關(guān)性。
　　3.本研究發(fā)現(xiàn)rs10836347位點(diǎn)共有CC、CT兩種基因型。以CC基因型為參考基因，未發(fā)現(xiàn)CT基因型與肝癌的患病風(fēng)險(xiǎn)有相關(guān)性（P=0.253）。以C等位基因?yàn)閰⒖蓟?，T基因型與肝癌的患病風(fēng)險(xiǎn)無相關(guān)性。
　　4.本研究發(fā)現(xiàn)rs13347位點(diǎn)共有CC、CT和TT三種基因型。以CC基因型為參考基因，攜帶CT基因型的個(gè)體可以增加肝癌的患病風(fēng)險(xiǎn)至1.626倍（95% CI：1.057

5、-2.500，P=0.027）。攜帶TT基因型的個(gè)體可以增加肝癌的患病風(fēng)險(xiǎn)至1.965倍（95% CI：1.043-3.702，P=0.037）。以C等位基因?yàn)閰⒖蓟?，T基因型可以增加肝癌的患病風(fēng)險(xiǎn)至1.461倍（95%CI：1.091-1.956，P=0.011）。在顯性模型分析中，CT+TT與CC基因型相比，可以增加肝癌的患病風(fēng)險(xiǎn)至1.697倍（95% CI：1.130-2.549，P=0.011）。在分析隱性模型時(shí)，未發(fā)現(xiàn)其與肝

6、癌的患病風(fēng)險(xiǎn)有相關(guān)性（P=0.549）。
　　5.對(duì)性別、年齡、吸煙和飲酒等危險(xiǎn)因素進(jìn)行分層分析時(shí)發(fā)現(xiàn)，女性人群中，rs13347位點(diǎn)的CT基因型可以增加肝癌的患病風(fēng)險(xiǎn)至2.675倍（95%CI：1.004-7.132，P=0.049），TT基因型可以增加肝癌的患病風(fēng)險(xiǎn)至5.922倍（95%CI：1.083-33.164，P=0.040）；在年齡≥50歲組中，rs13347位點(diǎn)的CT基因型可以顯著增加肝癌的患病風(fēng)險(xiǎn)至2.157倍（

7、95%CI：1.113-4.181，P=0.023），TT基因型顯著增加肝癌的患病風(fēng)險(xiǎn)至3.405倍（95%CI：1.263-9.178，P=0.015）；在飲酒人群中，rs10836347位點(diǎn)的CT基因型顯著增加肝癌的患病風(fēng)險(xiǎn)至4.552倍(95%CI：1.205-17.192，P=0.025)，rs13347位點(diǎn)的CT基因型與肝癌的患病風(fēng)險(xiǎn)無相關(guān)性。TT基因型顯著增加肝癌的患病風(fēng)險(xiǎn)至4.549倍（95%CI：1.244-16.635

8、，P=0.022）。
　　6.在進(jìn)行單倍型分析時(shí)發(fā)現(xiàn)，TTT單倍型顯著增加了肝癌的患病風(fēng)險(xiǎn)，表明TTT單倍型可能是肝癌的一個(gè)危險(xiǎn)因素。
　　結(jié)論：CD44基因rs8193、rs10836347位點(diǎn)的基因多態(tài)性與肝癌的患病風(fēng)險(xiǎn)無相關(guān)性。Rs13347位點(diǎn)的T等位基因的基因突變可增加肝癌的患病風(fēng)險(xiǎn)。
　　第二部分肝癌血清糖蛋白聚糖譜的性別差異研究
　　目的：糖基化修飾是蛋白質(zhì)翻譯后最常見的修飾之一。同一蛋白質(zhì)由于糖鏈

9、結(jié)構(gòu)的差異可能會(huì)導(dǎo)致功能的差異。男性肝癌的發(fā)病率明顯高于女性，而女性的預(yù)后生存率卻明顯高于男性。本部分研究通過凝集素芯片技術(shù)對(duì)男性和女性在肝癌發(fā)生過程中的血清糖蛋白譜進(jìn)行檢測(cè)，旨在研究其糖蛋白糖譜特征性變化，篩選出男女肝癌差異性的糖譜標(biāo)志，為男女肝癌發(fā)病差異研究提供新思路及實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：實(shí)驗(yàn)主要包含以下步驟：（1）血清低豐度蛋白的收集：等體積混合4組（男性對(duì)照組、男性肝癌組、女性對(duì)照組和女性肝癌組）患者血清，使用高豐度蛋白

10、去除柱收集血清低豐度蛋白；（2）將收集的低豐度蛋白經(jīng)除鹽、超濾、測(cè)定濃度后處理為待標(biāo)記緩沖液；（3）待測(cè)低豐度蛋白CY5標(biāo)記；（4）凝集素芯片的點(diǎn)制及芯片的雜交；（5）芯片掃描、數(shù)據(jù)提取；（6）數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用SPSS13.0，符合正態(tài)分布且方差齊性的數(shù)據(jù)采用兩獨(dú)立樣本的均數(shù)t檢驗(yàn)，方差不齊者采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)。（7）凝集素印跡。
　　結(jié)果：在男性肝癌組和對(duì)照組中共篩選出12種差異的凝集素親和信號(hào)，它們是AAL、ConA、DSL、EC

11、L、LCA、MNA-G、MNA-M、PHA-E、PSA、SNA,EBL、SNA-I、WFA,WFL。提示在男性肝癌的發(fā)生過程中血清糖蛋白聚糖譜中末端核心巖藻糖、雙天線結(jié)構(gòu)、α1,6連接的巖藻糖半乳糖胺、半乳糖、甘露糖殘基、平分型 GlcNAc等糖鏈結(jié)構(gòu)增加，β-1,4半乳糖-N-乙酰葡糖胺和GalNAcα/β-1,3/6Gal結(jié)構(gòu)減少。在女性肝癌組和對(duì)照組中共篩選出13種差異的凝集素親和信號(hào)，它們是AAL、CALSEPA、ConA、DS

12、L、LCA、LTL、MNA-M、PHA-E、RCA I,RCA120、SNA,EBL、SNA-I、WFA,WFL、WGA，提示在女性肝癌的發(fā)生過程中血清糖蛋白聚糖譜中末端核心巖藻糖、雙天線甘露糖結(jié)構(gòu)、α1,6連接的巖藻糖半乳糖胺、平分型GlcNAc等糖鏈結(jié)構(gòu)增加，高甘露糖、雙天線結(jié)構(gòu)和GalNAcα/β-1,3/6Gal結(jié)構(gòu)減少。在男性肝癌組和女性肝癌組中共篩選出7種差異的凝集素親和信號(hào)，提示男性肝癌患者血清中含有較多的雙天線、N-乙酰

13、基-D-半乳糖胺、半乳糖、甘露糖殘基、唾液酸等結(jié)構(gòu)，而平分型結(jié)構(gòu)和GalNAcα/β-1,3/6Gal結(jié)構(gòu)較女性肝癌患者減少。
　　結(jié)論：不同性別肝癌患者血清蛋白糖譜存在差異，男性肝癌的高發(fā)病率及高病死率可能和糖鏈結(jié)構(gòu)的改變有關(guān)。
　　第三部分血清DKK1糖蛋白對(duì)肝癌診斷價(jià)值的META分析
　　目的：系統(tǒng)評(píng)價(jià)血清DKK1對(duì)肝癌的診斷價(jià)值。
　　方法：計(jì)算機(jī)檢索外文數(shù)據(jù)庫：PubMed、EMBASE、Science

14、Direct、Elsevier、Springer、EBSCO、Cochran e library。中文數(shù)據(jù)庫：中國期刊網(wǎng)全文數(shù)據(jù)庫(CNKI)、萬方數(shù)據(jù)庫(WF)、中國生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫（CMCC）和中文科技期刊全文數(shù)據(jù)庫(VIP)，檢索時(shí)間截止至2016年1月。按照已經(jīng)制定好的的納入排除標(biāo)準(zhǔn)對(duì)檢索出來的文獻(xiàn)進(jìn)行嚴(yán)格的篩選，提取所需要的納入文獻(xiàn)的基本資料信息。使用Meta-DiSc軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，根據(jù)異質(zhì)性特點(diǎn)選擇相應(yīng)的效應(yīng)模型進(jìn)行計(jì)

15、算合并的敏感度、特異度、陽性似然比、陰性似然比和診斷比值比（DOR），繪制匯總受試者工作曲線（SROC），并計(jì)算曲線下面積（AUC）。
　　結(jié)果：共檢索到452篇相關(guān)文獻(xiàn)，最終納入11篇文獻(xiàn)，提供了13個(gè)DKK1診斷肝癌的研究結(jié)果。Meta分析數(shù)據(jù)顯示DKK1診斷肝癌的合并敏感度為72％，合并特異度為88％，DOR為25.95，AUC為0.872。其中的6篇文獻(xiàn)，提供8個(gè)DKK1聯(lián)合AFP診斷肝癌的研究結(jié)果，匯總DKK1聯(lián)合AFP