PPARδ調(diào)控VSMCs泡沫樣變的作用及機制研究.pdf

1、目的：
　　動脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)是導(dǎo)致心肌梗死和腦梗塞的主要原因。AS病變形成的核心環(huán)節(jié)是泡沫細胞的形成和聚集。血管平滑肌細胞(Vascular SmoothMuscle Cells，VSMCs)源性泡沫細胞在AS中具有重要作用，但是其具體的機制仍不十分清楚。正常情況下，滯留于動脈壁上的脂質(zhì)成分，尤其是氧化修飾的LDL可刺激VSMCs做出如下改變:分泌多種細胞外基質(zhì)、進行表型轉(zhuǎn)換、促進脂蛋白滯留、修

2、飾上調(diào)脂蛋白受體、減少膽固醇流出，形成泡沫細胞加速AS的形成，引發(fā)心腦血管疾病。因此研究VSMCs源性泡沫細胞形成的具體機制對于預(yù)防和治療AS具有非常重要的意義。
　　過氧化物酶體增殖物激活受體δ(peroxisome proliferator-activated receptorδ，PPARδ)屬于配體激活的轉(zhuǎn)錄因子核受體超家族成員之一。PPARδ在AS起始形成和進展中的作用受到越來越多的關(guān)注。PPARδ廣泛表達于全身所有的組織

3、，通過作用于靶分子啟動子，調(diào)控其表達，進而調(diào)節(jié)細胞代謝、炎癥和增殖等。研究發(fā)現(xiàn)PPARδ能夠抑制巨噬細胞(Macrophage，Mo)的泡沫化。PPARδ同樣對于VSMCs的多個生理病理過程具有重要的調(diào)節(jié)作用。但是PPARδ對于VSMCs的泡沫細胞形成過程調(diào)控作用及機制尚不清楚。因此，本課題著重探索激活PPARδ是否影響VSMCs的泡沫化。
　　酰基輔酶A:膽固醇?；D(zhuǎn)移酶1(Acyl-CoA:cholesterol acyltr

4、ansferases，ACAT1)是一個多重跨膜的膜蛋白，主要催化游離膽固醇酯化產(chǎn)生膽甾醇酯，在維持細胞內(nèi)膽固醇穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要的作用，并作為治療AS的藥物干預(yù)靶點。大量研究表明抑制ACAT1能夠發(fā)揮抗AS作用。我們推測:激活PPARδ后是否通過ACAT1途徑影響VSMCs源性泡沫細胞的形成。
　　本研究分為2個部分。
　　第一部分:觀察PPARδ對VSMCs的泡沫細胞形成的影響。
　　第二部分:初步探討PPARδ對VS

5、MCs泡沫化影響的可能機制。
　　方法:
　　1.培養(yǎng)C57BL/6J小鼠原代VSMCs采用組織塊貼塊法，鑒定VSMCs采用細胞免疫熒光染色。
　　2.PPARδ、ACAT1蛋白表達水平檢測用Western Blot法和細胞免疫熒光染色法。
　　3.脂質(zhì)沉積觀察采用油紅O染色法及細胞內(nèi)油紅光密度值采用酶標儀測量。
　　結(jié)果:
　　1.在氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density li

6、poprotein，oxLDL)誘導(dǎo)的VSMCs泡沫細胞形成過程中，PPARδ的蛋白表達水平呈時間依耐性降低，在48h達到最低值，并維持在較低水平。
　　2.分別應(yīng)用PPARδ的激動劑GW0742和抑制劑GSK0660，觀察oxLDL誘導(dǎo)的VSMCs泡沫細胞形成的影響，發(fā)現(xiàn)激活PPARδ后VSMCs內(nèi)的脂質(zhì)沉積和膽固醇量明顯減少，而抑制PPARδ則明顯增多，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3.oxLDL誘導(dǎo)的VSMCs泡沫樣變中A