彩絨革蓋菌草酸脫羧酶的誘導(dǎo)機(jī)制與發(fā)酵調(diào)控研究.pdf

1、草酸脫羧酶能催化草酸分解產(chǎn)生甲酸和二氧化碳，該酶的應(yīng)用主要集中在造紙廢水中的草酸鹽降解，草酸生物檢測(cè)等方面。然而，目前草酸脫羧酶的低產(chǎn)量限制了該酶的應(yīng)用。為了了解該酶的誘導(dǎo)機(jī)制，提高酶產(chǎn)量，本論文研究了草酸對(duì)彩絨革蓋菌誘導(dǎo)產(chǎn)酶的條件，并對(duì)該酶的破碎提取條件進(jìn)行優(yōu)化，測(cè)定了酶的穩(wěn)定性;后期利用發(fā)酵罐進(jìn)行了放大研究，另外嘗試使用植酸作為誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)產(chǎn)酶以及將麥稈水解液作為碳源培養(yǎng)菌絲體以提高酶產(chǎn)量。
　　 本課題首先對(duì)彩絨革蓋菌的誘導(dǎo)

2、條件進(jìn)行優(yōu)化，主要研究草酸濃度對(duì)產(chǎn)量的影響，然后利用分批添加草酸和補(bǔ)料來(lái)提高酶產(chǎn)量。通過(guò)測(cè)定菌體生長(zhǎng)過(guò)程中的不同參數(shù)（例如酶活、蛋白含量、生物量等）來(lái)比較不同誘導(dǎo)條件下的產(chǎn)酶優(yōu)劣，其中10 mM酶活最高，為12.6 U/L發(fā)酵液，20 mM蛋白比酶活最高，為27.54U/mg，20 mM為草酸最佳誘導(dǎo)濃度;通過(guò)分批添加草酸誘導(dǎo)技術(shù)，酶活最高可達(dá)1086 U/L發(fā)酵液，是單次誘導(dǎo)的86倍，蛋白比酶活達(dá)65，6 U/mg;補(bǔ)料后酶活可達(dá)20

3、60U/L發(fā)酵液，蛋白比酶活達(dá)75.2 U/mg。利用發(fā)酵罐培養(yǎng)彩絨革蓋菌，4 L/min的通氣量和pH5.0為較好的培養(yǎng)條件，添加草酸誘導(dǎo)后pH3.5對(duì)產(chǎn)酶有利。以草酸直接調(diào)節(jié)發(fā)酵液pH值并誘導(dǎo)產(chǎn)酶可保持較穩(wěn)定的酶產(chǎn)量。
　　 本課題還對(duì)彩絨革蓋菌的破碎條件及草酸脫羧酶的提取條件進(jìn)行了優(yōu)化，采用超聲破碎法以工作／休息時(shí)間比為6 s/4 s為佳，可以達(dá)到液氮冷凍研磨法98％的破碎效率，采用吐溫-80可以略微提高緩沖液對(duì)菌絲碎片的