枳精氨酸脫羧酶基因(PtADC)轉(zhuǎn)化煙草提高抗脫水研究.pdf

1、多胺是生物體在代謝過程中產(chǎn)生的具有生物活性的低分子量脂肪族含氮堿，廣泛存在于植物體內(nèi)，在逆境脅迫中對植物具有保護作用。多胺主要有腐胺、精胺和亞精胺三種類型，其中精氨酸脫羧酶(ADC)是多胺合成中的關鍵酶之一，催化精氨酸脫羧生成鯡精胺(Agm)，然后再由鯡精胺水解生成生成腐胺。本試驗采用根癌農(nóng)桿菌介導的葉盤法將枳精氨酸脫羧酶基因(PtADC)轉(zhuǎn)化到煙草中，并對T2代轉(zhuǎn)基因材料的抗性進行分析，主要結果有：
　　 1.PCR檢測及半定

2、量分析：PtADC基因表達載體通過根癌農(nóng)桿菌介導的葉盤法轉(zhuǎn)化煙草，共獲得12棵生根的抗性苗，以轉(zhuǎn)基因煙草的基因組DNA為模板，進行PCR檢測，以含目的基因的菌液質(zhì)粒為陽性對照，以ADCR+35SF和NPTⅡ引物均能擴增出特異的DNA片段，而野生型煙草植株未擴增出片段，說明pBI121-PtADC基因片段已經(jīng)轉(zhuǎn)入煙草基因組中；取其中的2株轉(zhuǎn)基因株系進行半定量RT-PCR分析，結果表明PtADC基因在煙草中表達。
　　 2.轉(zhuǎn)基因煙

3、草中腐胺含量測定：取2個超表達PtADC的T2株系進行脫水處理，然后進行腐胺的測定，結果表明脫水處理前和處理后，轉(zhuǎn)基因煙草中腐胺含量都比對照的含量高。
　　 3.轉(zhuǎn)基因煙草離體苗的相對失水率：取播種60d的轉(zhuǎn)基因和對照離體苗葉片，在室溫下進行脫水處理，然后測定相對失水率。結果表明：脫水處理之后對照的相對失水率比轉(zhuǎn)基因高，隨著脫水時間的延長，對照葉片較轉(zhuǎn)基因葉片嚴重萎蔫。
　　 4.離體苗的相對電導率和葉片的相對溫度：測定

4、離體葉片在脫水處理前后的電導率和葉片相對溫度，結果顯示，在未處理時轉(zhuǎn)基因材料和對照之間相對電導率的差異很小，而處理之后轉(zhuǎn)基因材料的電導率低于對照，轉(zhuǎn)基因葉片處理前后的相對溫度都比對照的高。
　　 5.離體苗的染色：葉片在脫水處理時會產(chǎn)生超氧陰離子和過氧化氫，對轉(zhuǎn)基因材料葉片和對照葉片進行DAB和NBT染色觀察。結果表明：脫水處理前，轉(zhuǎn)基因葉片和對照葉片之間差異很?。欢幚碇螅瑢φ盏念伾绒D(zhuǎn)基因深，暗示了葉片中產(chǎn)生的過氧化氫和超