油橄欖葉提取物的抗氧化活性和大鼠尿排泄特征研究.pdf

1、本文以油橄欖葉提取物為研究對象，通過清除·OH、DPPH·的能力評價其抗氧化能力，篩選并確證油橄欖葉提取物中的抗氧化活性成分，建立其HPLC含量測定方法。并通過尿藥代動力學(xué)方法研究大鼠灌胃油橄欖葉提取物后尿排泄特征，為以油橄欖葉提取物為原料的功能性產(chǎn)品的開發(fā)提供理論依據(jù)。主要研究內(nèi)容如下：
　　1.油橄欖葉提取物的抗氧化活性研究
　　(1)油橄欖葉提取物清除自由基活性的研究以橄欖苦苷和抗壞血酸為對照，采用鄰二氮菲-Fe2+氧

2、化法和DPPH·法測定油橄欖葉提取物清除·OH、DPPH·的活性。在優(yōu)選的反應(yīng)體系中，油橄欖葉提取物、橄欖苦苷和抗壞血酸對·OH和DPPH·的半數(shù)抑制率(IC50)分別為0.0791、0.0457和0.0515 mg/ml；0.0743、0.0581和0.0156 mg/ml。結(jié)果表明油橄欖葉提取物具有一定清除自由基的活性。
　　(2)油橄欖葉提取物中4種抗氧化活性成分的篩選和含量測定優(yōu)化了色譜條件，建立了高效液相色譜法同時測定油

3、橄欖葉提取物中4種抗氧化活性成分（橄欖苦苷、羥基酪醇醋酸酯、芹菜素-7-O-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-葡萄糖苷）含量的方法；采用HPLC-DPPH法篩選油橄欖葉提取物中抗氧化活性成分；通過HPLC-MS所測得的精確相對分子質(zhì)量，結(jié)合保留時間、紫外光譜圖和參考文獻(xiàn)對目標(biāo)化合物進(jìn)行確證。優(yōu)化后的色譜條件為色譜柱：大連依利特 Sinochrom ODS-BP柱(250 mm×4.6 mm,5μm)，檢測波長：230 nm、345 nm，流動

4、相：水:乙腈(v:v,75:25)，流速：1 ml/min；方法的檢出限為0.42～1.90μg/ml、回收率為98.12～107.83％、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性的RSD%均小于3%。
　　2.油橄欖葉提取物在大鼠尿液中的排泄特征研究
　　(1)橄欖苦苷代謝物的水解條件研究研究以尿液中羥基酪醇含量為評價指標(biāo)，選擇鹽酸濃度、水解時間和水解溫度為考察因素，采用單因素實驗和L9(34)正交實驗優(yōu)選橄欖苦苷代謝物的水解條件。最佳水解

5、條件為鹽酸濃度：2 mol/l、水解溫度：90℃、水解時間：60 min。
　　(2) HPLC法測定油橄欖葉提取物在大鼠尿液中的代謝物濃度及排泄特征研究建立了大鼠尿液中羥基酪醇的HPLC分析方法，并應(yīng)用該方法研究大鼠灌胃油橄欖葉提取物和橄欖苦苷后代謝產(chǎn)物羥基酪醇的尿排泄特征。色譜柱：大連依利特Sinochrom ODS-BP柱(250 mm×4.6 mm,5μm)，Jade C18保護(hù)柱(12.5 mm×4.6 mm,5μm)，

6、檢測波長：230 nm，流動相：水:甲醇(v:v,75:25)，流速：1 ml/min；羥基酪醇的尿藥濃度在4.49～575.00μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為82.98～90.43%，精密度、穩(wěn)定性的RSD%均小于15%。16只大鼠分為兩組，分別灌胃400 mg/kg油橄欖葉提取物（橄欖苦苷為100 mg/kg）和100 mg/kg橄欖苦苷，測定代謝產(chǎn)物水解產(chǎn)生的羥基酪醇的尿藥代動力學(xué)參數(shù)。大鼠灌胃后，0～10 h為主要排