Kruppel樣因子15對大鼠心臟壓力超-卸負荷后脂質沉積及心功能的調節(jié)作用.pdf

1、R541.04
　　.04？
　　目的:風濕性主動脈瓣狹窄是臨床常見的導致左心室超負荷的疾病，主動脈瓣膜替換術是典型的卸負荷過程。但通過手術解除心室負荷并不能使所有患者心功能得到有效的改善。前期研究發(fā)現，KLF15可以調節(jié)糖異生，調節(jié)骨骼肌脂質運用，協(xié)調生理體內氮平衡，心臟脂質代謝的一個重要調節(jié)器，聯系內質網應激和胰島素抵抗，KLF15缺乏對心力衰竭和動脈瘤形成也有密切關系。
　　脂質在心肌組織中蓄積可以產生毒性作用，

2、從而影響心臟功能。本研究結合前期研究，建立大鼠主動脈瓣上縮窄-松解模型，探尋心臟慢性壓力超/卸負荷后心臟脂質代謝變化，探討KLF15對心臟脂質代謝變化的調節(jié)作用，為臨床上左心室超負荷疾病患者術后提供一種新的輔助治療方法。
　　方法:1.動物分組:A1.SD大鼠行升主動脈縮窄術9周后并行心臟彩超后處死大鼠取出心臟;A2: SD大鼠行升主動脈縮窄術12周后并行心臟彩超處死大鼠取出心臟;A3:SD大鼠行升主動脈縮窄術15周后并行心臟彩超

3、處死大鼠取出心臟。B1:SD大鼠行升主動脈縮窄術9周后去縮窄當天行心臟彩超并處死大鼠取心臟;B2: SD大鼠行升主動脈縮窄術9周去縮窄3周后行心臟彩超并處死大鼠取心臟;B3: SD大鼠行升主動脈縮窄術9周去縮窄6周后行心臟彩超并處死大鼠取心臟。C1: SD大鼠只開胸，游離升主動脈不縮窄處理后又關閉胸腔，飼養(yǎng)9周后行心臟彩超并處死取心臟;C2: SD大鼠只開胸，游離升主動脈不縮窄處理后又關閉胸腔，飼養(yǎng)12周后行心臟彩超并處死取心臟;C3:

4、 SD大鼠只開胸，游離升主動脈不縮窄處理后又關閉胸腔，飼養(yǎng)15周后行心臟彩超并處死取心臟。
　　2.大鼠心臟超/卸負荷模型的建立:由胸骨上角路徑顯露升主動脈。以3-0Prolene滑線環(huán)繞升主動脈后打一個活結，把直徑為1.4mm鋼絲置于活的線結內與升主動脈平行排列后并放置一塊約0.2cm×0.5cm墊片收緊線結并立即撤出鋼絲，墊片這時已經在線結內，即制造出升主動脈狹窄。去縮窄術手術路徑與縮窄術相同，找到墊片剪掉結扎線結即完成松解。

5、
　　3.心臟超聲心動圖檢查:采用小動物超聲機(VEVO2100 Imaging system)，選用探頭頻率21MHz，于升主動脈縮窄9周后篩選合格左心室壓力超負荷模型以及升主動脈去縮窄術后3、6周后各組通過M型超聲測量以下數據:ejection fraction(EF)、fractionalshortening(FS)。
　　4.心肌中游離脂肪酸含量的測定根據脂肪酸試劑盒說明書檢測心肌組織中游離脂肪酸含量，最后將所得混合

6、液至于酶標儀中檢測570nm的吸收光，然后進行色度分析。
　　5.組織病理學觀察:取出心臟經冷凍(-70℃)處理后冰凍切片，行油紅O染色，用顯微圖像采集系統(tǒng)(Leica DMIRB)觀察并采圖。
　　6.心肌中KLF15 mRNA表達程度檢測根據TRIzol試劑(TaKaRa)提取心肌組織中總RNA，按照反轉錄的試劑盒和實時熒光定量PCR反應試劑盒說明書操作步驟操作，獲得cDNA的產物，并進行實時熒光定量PCR反應，β-ac

7、tin作為內參。RT-PCR檢測反應系統(tǒng)根據TaKaRa公司RNA PCR Kit(AMV)Ver3.0說明步驟操作進行。
　　7.Western blot檢測KLF15在心臟中的表達用Western blot方法檢測KLF15蛋白在心肌中的表達，ECL發(fā)光劑顯影，Quantity One軟件分析計算KLF15/GAPDH灰度比值。
　　結果:1.在非人工通氣下主動脈瓣上升主動脈縮窄術中死亡6只大鼠，死亡率為15％;去縮窄術

8、中死亡4只，死亡率11.8％。卸負荷當天、3、6周組及對照組各剩余5只，超聲心動圖可見大鼠升主動脈瓣上縮窄術后明顯縮窄;而卸負荷后縮窄處已明顯消失。
　　2.升主動脈縮窄9周后行超聲心動圖檢查:與對照組相比，隨著縮窄時間的延長，心功能(EF、FS)進一步降低(P＜0.01);與對照組相比，心臟卸負荷組心臟功能明顯降低(P＜0.05）;與心臟超負荷組9周相比，心臟卸負荷3周組與心臟卸負荷6周組心臟功能有所恢復，并具有統(tǒng)計學差異（P＜

9、0.05）。心臟卸負荷3周組與心臟卸負荷6周組比較沒有統(tǒng)計學差異。
　　3.根據游離脂肪酸試劑盒檢測結果:與對照組相比，隨著心臟壓力超負荷的時間越長，心肌組織中游離脂肪酸含量進一步增多(P＜0.05)，與壓力超負荷9周組相比，卸負荷3周、6周組心肌組織中游離脂肪酸含量有所減少，但是仍高于對照組中游離脂肪酸含量(P＜0.05)。
　　4.油紅O染色可見，與對照組相比，隨著心臟壓力超負荷的時間越長，心肌組織中脂質（紅色區(qū)域）沉積

10、進一步增多，與壓力超負荷9周組相比，卸負荷3周組中心肌脂質沉積有所減少，但是仍比對照組脂質沉積更多。
　　5.心臟壓力超負荷9周、12周、15周組心肌KLF15mRNA表達顯著低于相應對照組(P＜0.05)，而心臟壓力卸負荷0周、3周、6周組與心臟壓力超負荷9周組比較無顯著性差異。
　　6.與對照組相比，心臟壓力超負荷組KLF15蛋白表達明顯降低（P＜0.05）;與對照組相比，心臟卸負荷組KLF15蛋白表達明顯降低(P＜0.

11、05);與心臟壓力超負荷9周組相比，心臟卸負荷3周組及心臟卸負荷6周組KLF15蛋白表達無明顯變化。
　　結論:1.SD大鼠心臟超負荷后脂質沉積增多，卸負荷后脂質沉積有所減少，但是仍高于對照組。
　　2.SD大鼠升主動脈縮窄后KLF15含量降低，隨著縮窄時間的延長，心肌中KLF15含量進一步降低，升主動脈去縮窄后KLF15含量變化不明顯，隨著去縮窄的時間延長，仍處于一個低表達的狀態(tài)。
　　3.SD大鼠心臟卸負荷后，KL