納米顆粒NP-PPE-Ce6輔助的光動(dòng)力學(xué)療法有效治療胰腺癌的研究.pdf

1、目的：為了改善光動(dòng)力學(xué)療法對胰腺癌的治療效果，本研究將 NP-PPE/Ce6納米顆粒視為荷載二氫卟吩 e6的藥物輸送系統(tǒng)，探索了經(jīng)過 NP-PPE/Ce6納米顆粒改良的光動(dòng)力學(xué)療法改善胰腺癌治療效果的情況，為臨床上胰腺癌的有效治療提供新途徑。
　　方法：用兩親性聚合物與光敏劑Ce6在水溶液中通過自組裝的方式制備了納米顆粒NP-PPE/Ce6。利用動(dòng)態(tài)光散射儀檢測了NP-PPE/Ce6的尺寸分布和其穩(wěn)定性；運(yùn)用透射電子顯微鏡觀察了N

2、P-PPE/Ce6大小和形貌。分別通過熒光分光光度計(jì)和HPLC檢測了NP-PPE/Ce6中被荷載的光敏劑Ce6的釋放行為。實(shí)驗(yàn)用DCFH-DA作為指示劑檢驗(yàn)了NP-PPE/Ce6在細(xì)胞外水平和細(xì)胞水平產(chǎn)生活性氧的能力。運(yùn)用流式細(xì)胞儀和激光共聚焦顯微鏡觀察了 BxPC-3胰腺癌細(xì)胞對 NP-PPE/Ce6的攝取行為。NP-PPE/Ce6在細(xì)胞水平的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)采用了MTT實(shí)驗(yàn)和臺(tái)盼藍(lán)染色法來檢測。為了檢測 NP-PPE/Ce6在體內(nèi)被清除

3、及組織分布和富集的情況，實(shí)驗(yàn)采用 HPLC和小動(dòng)物成像儀。最后通過觀察治療后的腫瘤體積變化驗(yàn)證動(dòng)物活體研究NP-PPE/Ce6對胰腺癌BxPC-3的生長抑制作用；并將治療后的小鼠腫瘤組織游離下來制成病理切片，對各組的細(xì)胞增殖PCNA信號(hào)及凋亡TUNEL信號(hào)進(jìn)行檢測。
　　結(jié)果：1.基于細(xì)胞水平NP-PPE/Ce6輔助光動(dòng)力學(xué)療法治療胰腺癌的研究：（1）首先，我們成功制備了荷載光敏劑Ce6的納米顆粒NP-PPE/Ce6，并通過相關(guān)儀

4、器和方法檢測了其理化性質(zhì)，最后結(jié)果顯示NP-PPE/Ce6是尺寸為44.4±4.3nm，粒徑分散度（PDI）為0.108的球形顆粒。其穩(wěn)定性良好，在pH為5.5的酸性環(huán)境中被荷載的光敏劑從納米顆粒中釋放出來的速度明顯加快且檢測到的指示活性氧產(chǎn)量的DCF熒光信號(hào)亦增強(qiáng)；（2）在細(xì)胞水平，胰腺癌細(xì)胞BxPC-3對NP-PPE/Ce6具有攝取優(yōu)勢，NP-PPE/Ce6在促進(jìn)細(xì)胞對光敏劑的攝取的同時(shí)，用NP-PPE/Ce6處理過并經(jīng)光照的胰腺癌

5、細(xì)胞其內(nèi)被檢測到的活性氧相較于游離光敏劑處理的明顯增多。且細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)和凋亡細(xì)胞檢測皆說明NP-PPE/Ce6有效提高了光動(dòng)力學(xué)療法殺死胰腺癌細(xì)胞的作用。
　　2.基于動(dòng)物水平 NP-PPE/Ce6輔助光動(dòng)力學(xué)療法治療胰腺癌的研究：結(jié)果發(fā)現(xiàn)NP-PPE/Ce6表現(xiàn)出了延長光敏劑Ce6的血液清除率、促進(jìn)了組織對光敏劑Ce6的富集的作用；最后通過觀察治療后的腫瘤生長情況揭示NP-PPE/Ce6處理并加光照后的荷瘤老鼠的腫瘤生長明顯受到

6、抑制，其體積相較于治療前減少了60％。最后摘取的腫瘤組織經(jīng)稱重亦顯示NP-PPE/Ce6處理加光照的腫瘤組織的平均重量僅分別為經(jīng)NP-PPE/Ce6未加光照組和游離光敏劑Ce6處理加光照組的1/3和1/2。在進(jìn)行腫瘤細(xì)胞的增值與凋亡研究中發(fā)現(xiàn)，NP-PPE/Ce6聯(lián)合光照的腫瘤組織中通過免疫組化檢測到的凋亡信號(hào)相較于其他組明顯增強(qiáng)，而增殖信號(hào)卻明顯減弱。
　　結(jié)論：NP-PPE/Ce6納米顆粒作為光敏劑的輸送系統(tǒng)，它有效延長了光敏