RIN1與脊髓背角Spinophilin之間的相互作用及其調(diào)控機制.pdf

1、目的：Spinophilin能夠與細胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK1/2）、蛋白磷酸酶-1（PP1）、突觸后致密質(zhì)-95（PSD-95）等多種信號分子、骨架蛋白相互作用。作為一種錨定蛋白，Spinophilin能將其結(jié)合的蛋白（binding partners）定位在特定的亞細胞區(qū)域，決定著這些結(jié)合蛋白的作用特異性。前期資料顯示：Spinophilin表達于脊髓背角，能夠抑制興奮性谷氨酸受體介導(dǎo)的痛覺突觸傳遞，有效緩解外周組織損傷誘發(fā)的痛覺超

2、敏。RIN1(Ras and Rab Interacting protein-1)是一種多功能的胞內(nèi)信號蛋白，對調(diào)節(jié)ERK1/2、小GTP酶Rab5、酪氨酸激酶c-ABL等信號分子的活性至關(guān)重要，但RIN1的脊髓功能尚遠不清楚。本文探討了Spinophilin與RIN1之間的相互作用及其調(diào)控特征。
　　方法：本研究用免疫共沉淀法，探討了Spinophilin和RIN1在脊髓背角中的相互作用；通過大鼠鞘內(nèi)注射N-甲基-D-天門冬氨酸

3、（N-methyl-D-aspartate;NMDA）、代謝型谷氨酸受體1/5（metabotropic glutamate receptors1/5;mGluR1/5）激動劑DHPG、以及后足底皮下注射完全佛氏佐劑（Complete Freund’s Adjuvant;CFA），探討了NMDA受體、mGluR1/5受體以及外周炎性損傷對脊髓背角Spinophilin和RIN1之間的相互作用的影響。
　　結(jié)果：（1）免疫印跡實驗顯

4、示：RIN1表達于大鼠脊髓背角；（2）免疫共沉淀實驗顯示：抗Spinophilin的特異性抗體，能夠從大鼠脊髓背角中共沉淀出RIN1；抗RIN1的特異性抗體，也能夠共沉淀出Spinophilin，提示：RIN1和Spinophilin之間存在著分子間的、直接或間接的相互作用；（3）正常成年大鼠后足底皮下注射CFA（20μl），能夠明顯降低Von Frey纖維誘發(fā)的縮足閾值，誘發(fā)痛覺超敏；同時，抗Spinophilin的特異性抗體從脊髓背

5、角中沉淀出的RIN1含量明顯減少，提示：外周組織損傷會打斷RIN1和Spinophilin之間的相互作用；（4）給正常成年大鼠鞘內(nèi)注射NMDA受體激動劑NMDA（1μg）或mGluR1/5受體激動劑DHPG（20μg），在降低縮足閾值的同時，也會減弱RIN1和Spinophilin的相互作用，提示：RIN1/Spinophilin的結(jié)合受到NMDA受體和mGluR1/5受體的調(diào)控；（5）此外，改變蛋白磷酸酶的活性，也會影響RIN1和Sp

6、inophilin的結(jié)合，因為給正常成年大鼠鞘內(nèi)注射鈣調(diào)磷酸酶（Calcineurin）抑制劑Cyclosporine A（50μg）后，抗RIN1的特異性抗體從脊髓背角中沉淀出的Spinophilin含量會明顯減少；（6）NMDA受體的NR2A亞基可能也通過Spinophilin與RIN1相互作用。
　　結(jié)論：Spinophilin與RIN1具有密切的相互作用，兩者的相互作用受到NMDA受體、mGluR1/5受體以及蛋白磷酸酶的