選擇性Cox-2抑制劑在放射性腦損傷中的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分、大鼠放射性腦損傷模型中Cox-2mRNA及蛋白的動(dòng)態(tài)變化研究
　　目的：建立大鼠放射性腦損傷模型，并探究大鼠放射性腦損傷模型中Cox-2 mRNA及蛋白的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律。
　　方法：
　　1.健康大鼠112只，按隨機(jī)數(shù)字法分為健康對(duì)照組（只麻醉不照射，56只）和單純照射組[20Gy電子線（5MeV）單次全腦照射構(gòu)建放射性腦損傷模型，56只]，于照后3h、12h、1d、3d、7d、15d、30d處死，取全腦組織。

2、
　　2.HE法檢測大鼠放射性腦損傷模型的病理變化。
　　3.QRT-PCR法檢測大鼠放射性腦損傷模型中腦組織的Cox-2 mRNA的表達(dá)趨勢。
　　4.Western-Blot法檢測大鼠放射性腦損傷模型的腦組織中Cox-2總蛋白的變化趨勢。
　　5.免疫組織化學(xué)法檢測大鼠放射性腦損傷模型中腦內(nèi)海馬區(qū)的Cox-2蛋白表達(dá)量及位置。
　　結(jié)果：
　　1.HE染色法示：健康對(duì)照組大鼠腦組織未見明顯異常變化

3、。單純照射組腦組織在照后3h可見細(xì)胞水腫。第12h、1d、3d可見大量胞核固縮、胞漿空泡化，毛細(xì)血管間隙增寬，第7d可見微血栓形成，第15d至30d可見血栓機(jī)化再通及組織結(jié)構(gòu)紊亂等改變。
　　2.QRT-PCR示：大鼠放射性腦損傷模型中Cox-2mRNA表達(dá)量在電離輻射后先逐漸增高，達(dá)到峰值后開始減少，與空白組對(duì)比，照后3h、12h、1d、3d、7d的表達(dá)量有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05)。
　　3.Western-Blot示空

4、白組Cox-2蛋白幾乎不表達(dá)，電離輻射后其表達(dá)量開始增多，至第3d達(dá)到峰值，隨后減少，至照后30d接近正常。
　　4.免疫組化示照射組大鼠放射性腦損傷模型海馬區(qū)Cox-2蛋白表達(dá)變化趨勢與Western-Blot結(jié)果相一致。
　　結(jié)論：大鼠腦組織經(jīng)大劑量電離輻射后隨著時(shí)間的變化，腦組織內(nèi)Cox-2 mRNA及蛋白表達(dá)量的變化趨勢，與腦組織及血管損傷的變化相一致，可能與腦組織的炎癥反應(yīng)、血管損傷等事件的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。
　

5、　第二部分、選擇性Cox-2抑制劑減輕放射性腦損傷的機(jī)制研究
　　目的：探究選擇性Cox-2抑制劑塞來昔布在放射性腦損傷中的保護(hù)作用及其機(jī)制。
　　方法：
　　1.健康SD大鼠240只，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為健康組（80只，只麻醉不照射），單純照射組[80只，20Gy電子線（5MeV）單次全腦照射構(gòu)建放射性腦損傷模型]和照射加藥組（80只，麻醉同時(shí)予20Gy電子線（5MeV）單次全腦照射，照射前一天，照射當(dāng)天，照射后一天

6、予30mg/kg塞來昔布灌胃處理）。于照后3h、12h、1d、3d、7d、15d、30d處死，取全腦組織。
　　2.HE染色法觀察并比較塞來昔布干預(yù)后大鼠放射性腦損傷模型病理結(jié)構(gòu)改變。
　　3.腦組織干濕稱重法（BWC）觀察塞來昔布干預(yù)后大鼠放射性腦損傷模型含水量的變化。
　　4.依文思藍(lán)（EB）法檢測塞來昔布干預(yù)后大鼠放射性腦損傷模型血腦屏障的損傷程度。
　　5.QRT-PCR法檢測塞來昔布干預(yù)后大鼠放射性腦損

7、傷模型中NF-κB和 VEGF mRNA的表達(dá)變化趨勢。
　　6.Western-Blot和免疫組化法檢測塞來昔布干預(yù)后大鼠放射性腦損傷模型中NF-κB和VEGF總蛋白的變化趨勢。
　　結(jié)果：
　　1.HE染色結(jié)果顯示：照射加藥組和單純照射組與健康對(duì)照組相比，均可見大鼠腦組織在照后3h出現(xiàn)細(xì)胞水腫，第12h、1d、3d可見細(xì)胞水腫，胞核固縮。照后第7d有微血栓形成，照后第15d，30d可見腦組織結(jié)構(gòu)破壞，但照射加藥組損

8、傷程度明顯減輕。
　　2.EB法結(jié)果顯示：在單純照射組，大鼠腦組織中EB含量從電離輻射后第3h即開始升高，至照后第1d達(dá)到峰值，隨后開始減少，至照射后30d，腦組織內(nèi)EB含量接近健康對(duì)照組，與健康對(duì)照組相比，第3h,12h,1d,3d,7d,15d腦組織內(nèi)EB含量有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05)。在照射加藥組中，電離輻射后腦組織內(nèi)EB含量變化趨勢與單純照射組相似，但各時(shí)間點(diǎn)的含量均低于單純照射組，其中第3h,12h，1d測得的EB含量

9、具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05)。
　　3.BWC法顯示：單純照射組中，大鼠腦組織含水量從照后3h開始增加，第7d、15d達(dá)到峰值，隨后略微下降，第30d仍顯著高于健康對(duì)照組，其中各觀測時(shí)間點(diǎn)結(jié)果均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05)；在照射加藥組，腦組織含水量在受照后的變化趨勢與單純照射組類似，但含水量要少于單純照射組，與健康對(duì)照組相比，第3h、12h、1d、7d、15d、30d結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05)；與單純照射組相比，照射加藥

10、組第12h、1d、3d、7d、15d結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05)。
　　4.QRT-PCR結(jié)果示：在單純照射組中，NF-κBmRNA表達(dá)量在照后3h、12h、1d略有增高，至3d達(dá)到高峰，隨后開始下降，至照后第15d、30d，接近健康對(duì)照組。各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)量均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05)。照射加藥組中，第3h、12h，其表達(dá)量未見增高，第1d起，其表達(dá)量開始增高，至第7d，達(dá)到高峰，隨后下降，至第30d，接近正常。其中第1d、3

11、d、7d，照射加藥組NF-κBmRNA表達(dá)量較健康對(duì)照組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05)。與單純照射組相比，第3h、12h 、1d、3d、15d的NF-κBmRNA達(dá)量有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05)。
　　在單純照射組中，VEGFmRNA表達(dá)量在第3h，12h明顯增高，第1d略有下降，隨后再次升高，至第7d達(dá)到峰值，隨后減少，至第15d、30d稍高于健康對(duì)照組。其中各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)量變化均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05)。在照射加藥組中，

12、與健康對(duì)照組相比，第3h，VEGFmRNA達(dá)量未見增高，第12h起開始升高，至第7d達(dá)到最高，隨后下降，至第30d，接近健康對(duì)照組，其中第12h、1d、3d、7d、15d、30d有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05)；與單純照射組相比，照后第3h、12h、3d、7d大鼠腦組織的VEGFmRNA表達(dá)量要明顯減少，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05)。
　　5.免疫組化法和Western-Blot法顯示：健康對(duì)照組中NF-κB和VEGF蛋白表達(dá)量較低。

13、在單純照射組中，NF-κB蛋白在照后第3h增高不明顯，第12h開始增高，第3d,7d達(dá)到峰值，隨后開始減少，至第15d，30d接近健康對(duì)照組。VEGF蛋白從照后第3h，12h即可見顯著增高，第1d略有下降，隨后再次增高，至第7d達(dá)到峰值，然后再次下降，第30d接近健康對(duì)照組。而在照射加藥組中，NF-κB蛋白在照后第3h，12h表達(dá)量均接近健康對(duì)照組，第1d其表達(dá)量開始升高，至第7d達(dá)到高峰，隨后開始減少，第30d接近正常，且第1d,3d