2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、背景與目的:
  結蛋白基因突變導致的結蛋白病是一種遺傳性蛋白聚集性肌病,線粒體異常是結蛋白病最早發(fā)生的病理改變之一,然而導致線粒體出現(xiàn)異常的相關機制目前不完全清楚。膜孔通道蛋白1/電壓依賴陰離子通道1(VDAC1)是線粒體通透性轉化孔(mPTP)的重要調控亞基,當mPTP通透性增高時,大量細胞凋亡因子從線粒體膜間隙釋放到胞漿,導致細胞凋亡級聯(lián)反應。然而結蛋白病與VDAC1是否有明確關系尚無研究明確闡述,本研究通過免疫組化觀察結蛋

2、白沉積性肌病患者和結蛋白病動物模型中VDAC1及其相關凋亡蛋白(Bax、ATF2、Bcl-2、Bcl-xl、HKⅡ)的表達,探究結蛋白病肌細胞內線粒體異常的可能機制。
  方法:
  1.構建腺病毒包裝的突變型和野生型結蛋白基因的真核生物表達質粒。
  2.首次造模:實驗組將濃度為1.0×1011pfu/ml包裝有突變型結蛋白質粒的腺病毒按九宮格法分九點微量注射到28-35日齡雄性SD大鼠左后大腿肌內,每只大鼠注射總量

3、為100μl。右后大腿對應點注射等量包裝有野生型結蛋白基因質粒的腺病毒為對照組。分別于轉染后第2、7、14、21、28天各處死2只大鼠,取注射點處的肌肉行肌肉冰凍切片常規(guī)染色及desmin免疫組化染色。對比觀察出現(xiàn)以結蛋白沉積為主要改變的典型結蛋白病病理改變的轉染后天數(shù),以確定造模條件。
  3.重復造模:根據(jù)上述的實驗結果,將突變結蛋白基因的腺病毒微量注射4只28-35日齡雄性SD大鼠(方法同上),在已觀察到的出現(xiàn)以結蛋白沉積為

4、主要改變的轉染后天數(shù)取注射區(qū)局部肌肉,行冰凍切片desmin免疫組化染色,觀察模型的穩(wěn)定性。
  4.將造模成功動物模型與結蛋白沉積性肌病患者骨骼肌行常規(guī)病理及免疫熒光雙標染色,對比觀察VDAC1及其相關凋亡蛋白(Bax、ATF2、Bcl-2、Bcl-xl、HKⅡ)的表達。
  結果:
  1.首次造模發(fā)現(xiàn)轉染后第14天,2只SD大鼠實驗組的轉染局部肌肉的肌纖維內均出現(xiàn)結蛋白沉積等典型結蛋白病病理改變;取4只SD大鼠重

5、復造模,在轉染后第14天觀察到有3只大鼠實驗組轉染局部肌肉的肌纖維內出現(xiàn)結蛋白沉積等典型結蛋白病病理改變。
  2.結蛋白沉積性肌病患者與結蛋白病動物模型均在結蛋白沉積的肌纖維內出現(xiàn)VDAC1、促凋亡蛋白(Bax、ATF2)聚集高信號,而抗凋亡蛋白(Bcl-2、Bcl-xl、HKⅡ)無聚集。其中結蛋白沉積性肌病患者的結蛋白沉積肌纖維內Bcl-2、Bcl-xl較正常肌纖維信號無明顯變化,HKⅡ較正常信號略低;結蛋白病動物模型的結蛋白

6、沉積肌纖維內Bcl-2較正常信號略低,Bcl-xl、HKⅡ較正常肌纖維信號無明顯變化。
  結論:
  1.我們以腺病毒包被突變結蛋白基因以直接肌肉注射轉染方式成功構建出結蛋白病動物模型,驗證模型穩(wěn)定性高。
  2.結蛋白病的發(fā)生可能與線粒體相關性促凋亡蛋白(Bax、ATF2)的活化,抑制抗凋亡蛋白(Bcl-2、Bcl-xl、HKⅡ)的表達,刺激VDAC1開放、高表達,進而誘導凋亡因子從線粒體膜間隙釋放到胞質,導致細胞

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