穿心蓮內酯對ANIT誘導的大鼠肝損傷的保護作用及其機制研究.pdf

1、膽汁淤積是由膽汁生成障礙或/和膽汁流動障礙所致的一組疾病共同的臨床癥狀，常見的病因包括膽道結石、肝膽惡性腫瘤、妊娠期肝內膽汁淤積、進行性家族遺傳性肝內膽汁淤積癥等。由于膽汁排出障礙，導致大量膽汁成分蓄積在肝細胞中，引起肝細胞氧化應激、炎癥、凋亡和纖維化，如不進行有效干預，最終將演化為肝硬化。熊去氧膽酸是目前治療膽汁淤積的唯一有效藥物，但是對于原發(fā)性硬化性膽管炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化等特殊病例，仍缺乏有效的治療手段。因此，急需開發(fā)一種高效低

2、毒的膽汁淤積性肝疾病的有效藥物。
　　穿心蓮內酯是中藥穿心蓮的主要活性成分，具有抗菌、消炎、抗腫瘤、抗血小板聚集、抗心肌缺血、保護心腦血管、降血糖、免疫調節(jié)、保肝利膽等多種藥理活性。臨床上，相關制劑用于流行性感冒和腫瘤等疾病的治療，在中國以及亞洲國家應用廣泛。近年來，研究發(fā)現穿心蓮內酯類化合物對化學毒劑和藥物誘導的肝毒性具有顯著的保護作用。但是，穿心蓮內酯對ANIT誘導的大鼠膽汁淤積和肝損傷的作用及其相關機制尚未得到充分研究。

3、r>　　第一部分：穿心蓮內酯對ANIT誘導的大鼠肝損傷和膽汁淤積的保護作用
　　目的：
　　探討穿心蓮內酯對ANIT誘導的大鼠膽汁淤積和肝損傷的影響。
　　方法：
　　將36只健康成年雄性 SD大鼠（體重180-220 g）隨機分為以下6組：（1）空白溶劑對照組；（2）穿心蓮內酯正常給藥組（200 mg/kg）；（3）ANIT組（50 mg/kg）；（4）低劑量穿心蓮內酯（50 mg/kg）+ANIT組（50 m

4、g/kg）；（5）中劑量穿心蓮內酯（100 mg/kg）+ANIT組（50 mg/kg）；（6）高劑量穿心蓮內酯（200 mg/kg）+ANIT組（50 mg/kg）。穿心蓮內酯混懸于0.5%CMC-Na中，以10 ml/kg體積灌胃給藥，持續(xù)4天，每天上午一次。ANIT溶于食用橄欖油中口服灌胃給藥，于第二天中午給予第3/4/5/6組大鼠50 mg/kg。第1組同時灌胃給予同容量溶媒。ANIT灌胃后48h，麻醉大鼠并腹主動脈取血，分離肝

5、臟組織標本。應用試劑盒監(jiān)測血清或肝組織中ALT、 AST、 ALP、γ-GGT、總膽汁酸和總膽紅素等肝功、膽汁淤積標記物的含量水平。應用HE染色評價肝組織病理改變。
　　結果：
　　ANIT誘導大鼠血清中 ALT、 AST、 ALP、γ-GGT、總膽汁酸和總膽紅素等生化指標顯著升高，肝臟組織切片呈現病理樣改變。應用穿心蓮內酯預處理ANIT誘導的膽汁淤積大鼠，顯著逆轉大鼠肝功受損和膽汁淤積程度，肝組織病理改變減輕，表現出劑量依

6、賴的肝保護作用。
　　結論：
　　穿心蓮內酯對ANIT所致的大鼠肝損傷具有保護作用，減輕膽汁淤積程度。
　　第二部分：穿心蓮內酯通過抗炎和抗氧化活性逆轉ANIT所致大鼠膽汁淤積和肝損傷
　　目的：
　　探討穿心蓮內酯逆轉 ANIT誘導的大鼠膽汁淤積和肝損傷的作用機制。
　　方法：
　　將36只健康成年雄性 SD大鼠（體重180-220 g）隨機分為以下6組：（1）空白溶劑對照組；（2）穿心蓮內酯

7、正常給藥組（200 mg/kg）；（3）ANIT組（50 mg/kg）；（4）低劑量穿心蓮內酯（50 mg/kg）+ANIT組（50 mg/kg）；（5）中劑量穿心蓮內酯（100 mg/kg）+ANIT組（50 mg/kg）；（6）高劑量穿心蓮內酯（200 mg/kg）+ANIT組（50 mg/kg）。穿心蓮內酯混懸于0.5%CMC-Na中，以10 ml/kg體積灌胃給藥，持續(xù)4天，每天上午一次。ANIT溶于食用橄欖油中口服灌胃給藥，于

8、第二天中午給予第3/4/5/6組大鼠50 mg/kg。第1組同時灌胃給予同容量溶媒。ANIT灌胃后48h，麻醉大鼠并腹主動脈取血，分離肝臟組織標本。應用試劑盒監(jiān)測血清或肝組織中IL-6、TNF-α、MDA、SOD、GSH和GSH-PX等肝功、炎癥和氧化標記物的含量水平。Western blot檢測NF-κB、COX-2、SIRT1和 Nrf2的表達水平。SIRT1 mRNA表達水平由real time PCR測定。
　　結果：

9、r>　　ANIT誘導大鼠血清中IL-6和TNF-α水平升高，NF-κB/COX-2表達上調。而且，ANIT升高大鼠血清中MDA水平，SOD、GSH和GSH-PX水平下調。穿心蓮內酯劑量依賴的逆轉ANIT所致血清炎癥因子水平上調和NF-κB/COX-2通路激活，抑制炎癥反應。最后，穿心蓮內酯劑量依賴的逆轉 ANIT所致的MDA含量升高、GSH含量下降、以及 SOD和GSH-Px活性下調，作用機制可能涉及上調大鼠肝臟中SIRT1和Nrf2的