PKC-α-Nrf2-HO-1信號通路在電針干預兔內(nèi)毒素休克急性肺損傷中的作用.pdf

1、背景：內(nèi)毒素休克可致急性肺損傷，嚴重者可導致急性呼吸窘迫綜合癥(ARDS)甚至多器官功能衰竭，病死率較高。研究證實，電針刺激足三里和肺俞穴，可減輕內(nèi)毒素休克所致急性肺損傷。蛋白激酶 C(PKC)屬于絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族，廣泛存在于機體的組織細胞內(nèi)，它包括12種同工酶，PKC-α是其中之一且經(jīng)常用來作為研究對象。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，Nrf2-ARE通路激活后可使內(nèi)毒素休克致急性肺損傷減輕。作為 Nrf2-ARE通路的下游基因，血紅

2、素氧合酶（HO-1）在應激狀態(tài)下，與其催化產(chǎn)物在機體發(fā)揮重要的內(nèi)源性保護作用。通過對相關(guān)文獻報道的查閱，我們尚未發(fā)現(xiàn)在對內(nèi)毒素致兔急性肺損傷模型得研究中，有人將電針刺干預與PKC-α- Nrf2/HO-1信號通路的關(guān)系進行過闡述。
　　目的：本研究擬通過觀察兔內(nèi)毒素休克致急性肺損傷模型中，不同組別肺組織病理學改變及分子層面各項研究指標表達水平的變化,來明確 PKC-α-Nrf2/HO-1通路在電針刺激相關(guān)穴位（足三里、內(nèi)關(guān)穴和肺俞

3、穴）,干預兔內(nèi)毒素休克致急性肺損傷中的作用。
　　方法：健康雄性新西蘭大白兔80只，2月齡，體重1.5~2.0Kg，采取隨機數(shù)字表法分為8組(n=10)：對照組(C組)、內(nèi)毒素休克所致急性肺損傷組( L組)、電針刺激穴位+L組(EL組)、電針刺激非穴位+L組(SEL組)、PKC抑制劑白屈菜紅堿組（Che組）、二甲基亞砜組（E組）、PKC抑制劑+L組（LC組）、電針刺+PKC抑制劑+L組（ELC組）。EL組、ELC組電針刺激雙側(cè)足三

4、里、內(nèi)關(guān)穴和肺俞穴，疏密波，頻率2Hz/15Hz，刺激電流1~2mA，波寬0.2~0.6ms，刺激強度以兔肢體出現(xiàn)與電針頻率一致的輕微顫動為宜，1次/d，30min/次，連續(xù)5d；SEL組電針刺激足三里、內(nèi)關(guān)穴和肺俞穴旁開0.5cm非經(jīng)非穴處，針刺參數(shù)同 EL組。實驗當日，電針刺貫穿整個實驗過程。實驗開始后，按實驗組別分別進行處理。Che組及 LC組經(jīng)耳緣靜脈注射白屈菜紅堿5mg/kg（溶于0.5ml0.1％二甲基亞砜），E組靜脈注射0

5、.1%二甲基亞砜0.5ml，其余組給予等容量的生理鹽水；30分鐘后L組、EL組、SEL組、LC組及ELC組經(jīng)兔耳緣靜脈給予 LPS5mg/kg(溶于2ml生理鹽水)，其余組給予等容量的生理鹽水。以注射 LPS2h內(nèi)平均動脈壓下降≥基礎(chǔ)值的25%為模型制備成功。兔耳緣靜脈靜脈注射 LPS或生理鹽水后6h時，取頸總動脈血行血氣分析后處死大白兔，取肺組織，進行病理學觀察及肺損傷評分，計算肺組織濕/干重比(W/D)，測定肺組織勻漿中 MDA含量

6、及 SOD活性，檢測 Nrf2mRNA、HO-1mRNA、HO-1蛋白、Nrf2核蛋白和總蛋白以及PKC-α蛋白表達水平。
　　結(jié)果：與C組相比，L組、EL組、SEL組、LC組及ELC組SOD活性活性降低，肺組織病理學評分、W/D、MDA含量升高，Nrf2 mRNA、HO-1mRNA、HO-1蛋白、PKC-α蛋白及Nrf2核蛋白和總蛋白表達上調(diào)(P<0.05)， Che組、E組上述各指標差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；與 L組相

7、比，EL組肺組織病理學評分、W/D、MDA含量降低，SOD活性升高，Nrf2mRNA、HO-1mRNA、HO-1蛋白、PKC-α、Nrf2核蛋白及總蛋白表達上調(diào)(P<0.05)，LC組、ELC組肺組織病理學評分、W/D、MDA含量升高， SOD活性下降， Nrf2mRNA、HO-1mRNA、HO-1蛋白、PKC-α蛋白及 Nrf2核蛋白和總蛋白表達下調(diào)（P<0.05）， SEL組上述指標差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；與EL組相比，S

8、EL組、ELC組肺組織病理學評分、W/D、MDA含量升高，SOD活性降低，Nrf2mRNA、HO-1mRNA、HO-1蛋白、PKC-α蛋白及 Nrf2核蛋白和總蛋白表達下調(diào)(P<0.05)；與 LC組相比，ELC組肺組織病理學評分、W/D、MDA含量降低，SOD活性升高，Nrf2mRNA、HO-1mRNA、HO-1蛋白、PKC-α蛋白及 Nrf2核蛋白和總蛋白表達上調(diào)（P<0.05）。
　　結(jié)論：電針刺干預兔內(nèi)毒素休克肺損傷中，可