電針刺對內(nèi)毒素休克兔腎損傷中Keap1-Nrf2-ARE通路的影響.pdf

1、內(nèi)毒素血癥(endotoxaemia)是臨床上嚴(yán)重創(chuàng)傷、感染后的常見并發(fā)癥，也是急性腎損傷(acute kidney injury，AKI)和多臟器功能不全綜合征(multiple organdysfunction syndrome，MODS)的常見因素。內(nèi)毒素性急性腎損傷被認(rèn)為是預(yù)測危重癥患者病情發(fā)生發(fā)展及預(yù)后的獨立危險因素。大量研究表明電針刺對腎功能有一定的保護作用，但具體機制尚不清楚。
　　目的:本研究擬通過電針刺激足三里穴

2、和腎俞穴來探討電針刺對內(nèi)毒素性急性腎損傷腎臟的保護作用及其與Keap1-Nrf2/ARE通路的關(guān)系。
　　方法:清潔級健康成年雄性新西蘭大白兔，體質(zhì)量1.5-2.0kg，采用隨機數(shù)字表法將其隨機分為4組(n=10):對照組(C)、內(nèi)毒素性急性腎損傷組(AKI)、電針刺+內(nèi)毒素性急性腎損傷組(EA)、非穴位電針刺+內(nèi)毒素性急性腎損傷組(SEA)。所有動物以20％烏拉坦(1g/kg)腹腔注射麻醉，保持自主呼吸，右側(cè)頸內(nèi)動脈置管監(jiān)測動脈

3、血壓。從耳緣靜脈注射脂多糖(LPS)5mg/kg建立兔內(nèi)毒素性急性腎損傷模型，給予LPS后2h血壓下降至基線值的75％及以下為內(nèi)毒素性AKI模型制備成功的標(biāo)準(zhǔn)。EA組刺激參數(shù):疏密波，頻率15 Hz，刺激強度以兔出現(xiàn)輕微肌顫為度，實驗前5天每天電針刺足三里、腎俞穴1次，每次持續(xù)10min，留針1h出針;實驗時電針刺從模型建立持續(xù)至實驗結(jié)束。SEA組選擇針刺組穴位旁開0.5cm部位，刺激參數(shù)和時間同EA組。LPS注射6小時后，從頸動脈采血

4、樣5ml，經(jīng)膀胱取尿液2ml。采用全自動生化分析儀測定血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、尿α1微球蛋白(α1-MG)的濃度。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定血清腫瘤壞死因子α(TNF-α)和白細胞介素10(IL-10)濃度。將兔放血處死取腎臟，左腎用多聚甲醛固定，采用蘇木素伊紅(HE)染色法，觀察腎組織病理學(xué)改變并評分(HSK)，測定腎組織含水率(WCR)。右腎迅速放入凍存管液氮中速凍，后放入-80℃中保存。制取腎組織勻漿，采用黃

5、嘌呤氧化酶法測定超氧化物岐化酶(SOD)活性，采用硫代巴比妥酸法測定丙二醛(MDA)含量。Western blot法測定腎組織Nrf2核蛋白、Nrf2總蛋白、HO-1蛋白表達。RT-PCR法測定Nrf2 mRNA、HO-1 mRNA。
　　結(jié)果:與C組比較，AKI、EA、SEA組血清BUN、Cr、TNF-α、IL-10、尿α1-MG、HSK評分、WCR、MDA含量均升高，SOD活性降低， Nrf2mRNA、HO-1 mRNA、Nr

6、f2核蛋白、Nrf2總蛋白、HO-1蛋白的表達均上調(diào)(P＜0.05);與AKI組比較，EA組血清BUN、Cr、TNF-α、尿α1-MG、HSK評分、WCR、MDA含量均降低，血清IL-10濃度、SOD活性升高，Nrf2mRNA、HO-1 mRNA、Nrf2核蛋白、Nrf2總蛋白、HO-1蛋白的表達均上調(diào)(P＜0.05);與EA組比較，SEA組血清BUN、Cr、TNF-α、尿α1-MG、HSK評分、WCR、MDA含量均升高，血清IL-10