天花粉蛋白通過調(diào)控miR-4455影響宮頸癌Hela細(xì)胞侵襲、遷移的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)以宮頸癌Hela細(xì)胞為研究對(duì)象，分析天花粉蛋白(TCS)處理前后Hela細(xì)胞中miRNA表達(dá)譜的變化情況。探索TCS處理Hela細(xì)胞后miR-4455表達(dá)上調(diào)的機(jī)制以及對(duì)細(xì)胞遷移和侵襲的影響。
　　方法：⑴TCS處理人宮頸癌Hela細(xì)胞后，基因芯片技術(shù)分析藥物處理前后Hela細(xì)胞中miRNA表達(dá)譜的變化情況。⑵實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)驗(yàn)證TCS對(duì)miR-4455表達(dá)的影響是否與芯片結(jié)果一致。⑶克隆miR-4455啟動(dòng)子并用報(bào)

2、告基因技術(shù)驗(yàn)證其活性。⑷硫化測(cè)序PCR技術(shù)驗(yàn)證TCS處理Hela細(xì)胞后對(duì)miR-4455甲基化狀態(tài)的影響。⑸Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)高表達(dá)miR-4455對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響。⑹Western blot檢測(cè)高表達(dá)miR-4455對(duì)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)相關(guān)標(biāo)志蛋白E-cad的影響。
　　結(jié)果：①利用miRNA芯片技術(shù)成功篩選出TCS處理前后差異表達(dá)的miRNAs，其中有10個(gè)miRNA表達(dá)下調(diào)，15個(gè)表達(dá)上調(diào)

3、。②實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證了miR-4455表達(dá)上調(diào)與芯片結(jié)果相一致。③報(bào)告基因分析發(fā)現(xiàn)miR-4455上游1896bp片段中含有一個(gè)較弱的啟動(dòng)子。④硫化測(cè)序PCR分析發(fā)現(xiàn)TCS處理宮頸癌Hela細(xì)胞后對(duì)miR-4455啟動(dòng)子有去甲基化作用。⑤Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示高表達(dá)miR-4455能在一定程度抑制宮頸癌Hela細(xì)胞遷移和侵襲能力。⑥Western blot結(jié)果表明高表達(dá)miR-4455增加了EMT相關(guān)上皮標(biāo)志蛋白E-cad的表