治療原發(fā)性肺癌的肺吸入冬凌草甲素大多孔微粒的研究.pdf

1、肺癌發(fā)生率和死亡率都很高，其中非小細(xì)胞肺癌（ NSCLC）占主要，約80-85％。NSCLC臨床治療以化療和放療為主，常通過靜脈和口服給藥，全身分布，到達(dá)肺中的藥物有限，毒副作用大。本研究中采用肺吸入大多孔微粒制劑局部治療肺癌，減小藥量，降低毒性。選擇冬凌草甲素作為抗腫瘤藥物，但其水溶性差，結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，應(yīng)用一直受到限制。本文采用兩種不同的工藝制備載冬凌草甲素的 PLGA肺吸入大多孔微粒，克服了冬凌草甲素的缺點(diǎn)，并避免被肺泡巨噬細(xì)胞吞噬，

2、增加藥物到達(dá)腫瘤組織的濃度。以粉末性質(zhì)、載藥量和包封率為指標(biāo)，篩選最優(yōu)處方和工藝，并對大多孔微粒進(jìn)行體內(nèi)外性質(zhì)考察。用化學(xué)誘導(dǎo)的方法建立了原發(fā)性非小細(xì)胞肺癌模型，用于抗腫瘤藥效學(xué)評價(jià)。直接氣管噴入冬凌草甲素大多孔微粒，考察了其體內(nèi)抗腫瘤效果和作用機(jī)制，探討了肺部給藥治療原發(fā)性肺癌的可行性和理論基礎(chǔ)。具體研究內(nèi)容如下：
　　1.乳液溶劑揮發(fā)法制備冬凌草甲素大多孔微粒（LPMP）
　　通過工藝參數(shù)調(diào)整，制備滿足需求的幾何粒徑大且

3、多孔的微粒，并以包封率和載藥量為指標(biāo)，用正交實(shí)驗(yàn)篩選出冬凌草甲素大多孔微粒最優(yōu)處方為35%PLGA、1.5%致孔劑和1%PVA（ w/v）。其載藥量和包封率分別為9.3±0.1%和81.5±1.0%。在掃描電鏡下觀察微粒表面多孔，內(nèi)部也有孔道分布。測得大多孔微粒幾何粒徑 D5011.63±2.32μm，堆密度0.057±0.014g/ml，休止角26.52±4.1°，空氣動(dòng)力學(xué)粒徑2.72±0.28μm，肺部沉積率29.7%，適合肺吸入

4、給藥。
　　2.靜電紡絲法制備冬凌草甲素多孔微粒（EPM）
　　嘗試用靜電紡絲的方法制備多孔微粒，工藝簡便，環(huán)境因素可控。以多孔微粒外觀為指標(biāo)優(yōu)選冬凌草甲素多孔微粒最優(yōu)處方為6%PLGA、1.5%致孔劑和油水比為10：1。其載藥量和包封率分別為5.86±0.2%和58.59±2.0%。在掃描電鏡下觀察到微粒表面多孔，內(nèi)部也有孔道分布。測得靜電紡微粒粒徑 D505.27μm，堆密度0.151±0.022g/ml，空氣動(dòng)力學(xué)粒徑

5、2.05±0.14μm，休止角29.37±6.6°，肺部沉積率19.1%，符合肺吸入粉霧劑要求。
　　3.冬凌草甲素含量測定方法
　　建立了HPLC法測定冬凌草甲素的含量，用于計(jì)算冬凌草甲素在制劑中的含量。該方法準(zhǔn)確、可靠。
　　4.冬凌草甲素大多孔微粒及靜電紡多孔微粒體內(nèi)外評價(jià)
　　體外釋放實(shí)驗(yàn)表明48小時(shí)冬凌草甲素可從大多孔微粒中釋放達(dá)到80%，釋放機(jī)理符合Ritger-Peppas釋放，屬于骨架溶蝕和藥物擴(kuò)

6、散共同作用。通過體外肺巨噬細(xì)胞清除實(shí)驗(yàn)，證明了在12小時(shí)內(nèi)，大多孔微粒在釋藥的同時(shí)，也能避免被巨噬細(xì)胞吞噬，提高藥物在腫瘤細(xì)胞的濃度。體內(nèi)CT成像表明大多孔微粒大部分沉積在肺部深處，體外用NGI測定大多孔微粒的FPF值為29.7%，體內(nèi)外相關(guān)性較好。
　　在120小時(shí)內(nèi)，冬凌草甲素在靜電紡多孔微粒中釋放達(dá)到70%，釋放機(jī)理和體內(nèi)外肺部沉積結(jié)果與乳液溶劑揮發(fā)法制備的大多孔微粒相似。
　　5.原發(fā)性非小細(xì)胞肺癌模型建立
　

7、　采用三甲基膽蒽和二乙基亞硝胺聯(lián)合化學(xué)誘導(dǎo)的方式，在短時(shí)間內(nèi)建立了原發(fā)性非小細(xì)胞肺癌，并通過凋亡、甲基化等生化檢查，證明原發(fā)性肺癌建立成功。根據(jù)組織病理切片證明為非小細(xì)胞肺癌中的鱗癌。與移植瘤和轉(zhuǎn)移瘤相比，化學(xué)誘導(dǎo)的方法建立的腫瘤模型與臨床上肺癌發(fā)生過程相似。
　　6.冬凌草甲素大多孔微粒及靜電紡多孔微粒治療原發(fā)性肺癌的效果
　　體內(nèi)抗NSCLC藥效結(jié)果證明了大多孔微粒能很好提高冬凌草甲素對肺癌的抗腫瘤作用，與陽性藥相當(dāng)。與

8、原料藥治療組相比，冬凌草甲素大多孔微粒組的MMP降低， CD31和Bcl-2都有低表達(dá)（p<0.01）， Caspase-3、Caspase-9和Bax都為高表達(dá)（p<0.05），驗(yàn)證了冬凌草甲素體內(nèi)抗癌機(jī)制主要通過線粒體途徑，進(jìn)一步激活Caspase聯(lián)級信號通路，引發(fā)癌細(xì)胞凋亡，為臨床提供一種新型治療肺癌的藥物和給藥途徑。
　　通過CT成像和病理的初步抗癌藥效結(jié)果顯示靜電紡多孔微粒也能很好的提高冬凌草甲素對肺癌的治療效果。提供了