冬凌草甲素的提取純化及其脂質(zhì)體制劑的研究.pdf

1、冬凌草甲素(ORI)為唇形科香茶菜屬植物冬凌草中的最主要抗癌有效成分。具有資源豐富、藥理活性強(qiáng)等優(yōu)勢(shì)，但其獨(dú)特的理化性質(zhì)制約了其制劑的研究發(fā)展。本文旨在采用現(xiàn)代的提取分離純化技術(shù)，提高冬凌草有效成分的含量并建立切實(shí)可行的質(zhì)量控制方法；在考察理化性質(zhì)的基礎(chǔ)上，制備冬凌草甲素脂質(zhì)體，提高冬凌草甲素的抗癌作用和臨床療效。 首先采用高效液相色譜法建立了冬凌草甲素的體外分析方法，為提取分離過(guò)程及進(jìn)一步的處方前研究提供了有效的分析手段。考察

2、了冬凌草甲素的提取純化工藝，采用乙醇冷浸后回流提取，活性炭超聲脫色，硅膠柱層析的方法分離冬凌草甲素，使得提取物中冬凌草甲素的含量達(dá)到了80％以上。 對(duì)冬凌草甲素理化性質(zhì)的研究結(jié)果表明：冬凌草甲素在水和磷酸鹽緩沖液中極微溶解；在水中油水分配系數(shù)對(duì)數(shù)值為1.74，在不同pH值PBS中的油水分配系數(shù)對(duì)數(shù)值在1.2～1.3范圍內(nèi)；冬凌草甲素水溶液對(duì)高溫不穩(wěn)定，在100℃下加熱8h降解了28.35％；水溶液在光照下放置15天稍有降解；溶液

3、pH值對(duì)其穩(wěn)定性影響較大，在偏酸性或中性條件下穩(wěn)定，pH>8以上穩(wěn)定性變得很差；固體狀態(tài)下穩(wěn)定性較好。 以薄膜分散-超聲法制備冬凌草甲素脂質(zhì)體，采用SephadexG-25微柱離心法分離脂質(zhì)體與游離藥物，以建立包封率的測(cè)定方法。以包封率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)處方因素(磷脂濃度、膽固醇用量、藥物濃度和表面活性劑的濃度)和工藝因素(水化介質(zhì)磷酸鹽緩沖液pH值、水化時(shí)間、水化溫度對(duì)包封率的影響)進(jìn)行單因素考察。以及鑒于脂質(zhì)體在液態(tài)狀態(tài)下的物理

4、不穩(wěn)定性，進(jìn)一步將脂質(zhì)體冷凍干燥?？疾靸龈杀Ｗo(hù)劑種類(lèi)、凍干保護(hù)劑濃度對(duì)凍干制劑的影響。研究結(jié)果，最優(yōu)處方為：磷脂濃度為2％，膽固醇和磷脂的質(zhì)量比為1：4，藥物和磷脂質(zhì)量比為1：20，吐溫80用量為水化介質(zhì)的2％，水化介質(zhì)pH值為6.5的PBS，水化時(shí)間為30min，水化溫度為50℃。按照上述條件進(jìn)行試驗(yàn)，制備3批脂質(zhì)體，測(cè)得其包封率平均值為(65.25±3.63)％(n=3)。采用10％甘露醇為凍干保護(hù)劑，凍干產(chǎn)品復(fù)溶良好，復(fù)溶后粒徑變

5、化不顯著。 考察了冬凌草甲素脂質(zhì)體的制劑學(xué)性質(zhì)。冬凌草甲素脂質(zhì)體在透射電鏡下多為近球形的單室結(jié)構(gòu)，體積平均徑為165±23nm，凍干品水化后為173±36nm，粒徑分布呈現(xiàn)均勻的單峰。脂質(zhì)體混懸液4℃放置2個(gè)月包封率降低了14.15％，粒徑稍有增大，凍干品室溫放置2個(gè)月包封率、粒徑無(wú)明顯變化。體外無(wú)溶血反應(yīng)，滿足靜脈注射要求。 通過(guò)小鼠尾靜脈注射比較了冬凌草甲素溶液劑與冬凌草甲素脂質(zhì)體在小鼠體內(nèi)組織分布。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與

6、冬凌草甲素溶液劑相比，冬凌草甲素脂質(zhì)體在小鼠心臟內(nèi)濃度明顯降低，而在肝臟、脾中濃度升高。說(shuō)明冬凌草甲素制成脂質(zhì)體后，可以顯著降低藥物的心臟毒性，提高藥物肝脾靶向性。對(duì)血漿中藥物濃度數(shù)據(jù)進(jìn)行3P87分析，結(jié)果表明，冬凌草甲素溶液劑的快分布、慢分布和消除半衰期都很短，而制成脂質(zhì)體制劑后，其慢分布半衰期由0.919延長(zhǎng)4.756h，消除半衰期由6.549增至16.031h。說(shuō)明冬凌草甲素制成脂質(zhì)體后，可明顯延長(zhǎng)其在體內(nèi)的循環(huán)和作用時(shí)間，有助于