二甲雙胍減輕對乙酰氨基酚誘導的中毒性肝炎.pdf

1、目的：二甲雙胍（metformin, MET）是臨床上治療Ⅱ型糖尿病的常用藥物。近年來的研究還發(fā)現(xiàn)MET具有抗炎、抗氧化作用，這些效應主要依賴于腺苷酸活化蛋白激酶（ AMP activated protein kinase, AMPK）。由對乙酰氨基酚（acetaminophen, APAP）所誘導的急性肝損傷是臨床上研究藥物性肝炎的重要模型。APAP誘導的急性肝炎與其在肝臟內(nèi)代謝產(chǎn)生的毒性物質(zhì)有關(guān),肝細胞內(nèi)經(jīng) CYP450酶系代謝轉(zhuǎn)化

2、APAP可生成高活性的親電子物 N-乙酰對苯醌亞胺（N-acetyl-p-benzo-quinone imine, NAPQI）。NAPQI可引起肝細胞內(nèi)的氧化應激和炎癥反應并造成肝組織損傷。本文旨在探討MET對APAP誘導的急性中毒性肝炎的潛在保護效應以及與AMPK之間的關(guān)聯(lián)。
　　方法：雄性昆明小鼠6-8周齡，體重18-20 g，腹腔注射APAP（350 mg/kg，溶于預熱的PBS）誘導急性中毒性肝炎。為探討MET的潛在保護

3、效應，400 mg/kg的MET（溶于PBS）在APAP暴露前0.5 h經(jīng)腹腔注入。為探討MET是否通過AMPK發(fā)揮效應，一批小鼠在MET注入前0.5 h經(jīng)腹腔注入AMPK抑制劑dorsomorphin（15 mg/kg，溶于聚乙二醇溶液），另一批小鼠在APAP暴露前0.5 h經(jīng)腹腔注入AMPK激活劑A-769662（30 mg/kg，溶于聚乙二醇溶液）。各組動物在APAP暴露8 h后處死，及時采集血液樣本和肝組織樣本。血液樣本中 TN

4、F-α和IL-6水平采用ELISA法測定；使用化學顯色試劑盒檢測血液樣本中谷丙、谷草轉(zhuǎn)氨酶水平，檢測肝組織中反映脂質(zhì)氧化的指標丙二醛（malondialdehyde, MDA）含量及過氧化氫酶（catalase, CAT）活性。肝組織經(jīng)福爾馬林固定后，常規(guī)HE染色觀察組織病理學變化。
　　結(jié)果：本研究發(fā)現(xiàn)：①用MET）處理APAP誘導的急性肝炎模型， ALT、AST上升的水平明顯受抑，與此相一致的是，小鼠肝組織內(nèi)MDA水平的降低，

5、血漿中TNF-α和IL-6水平明顯下調(diào)，以及肝組織病理損傷的減輕；②MET的保肝效應不依賴于 AMPK：AMPK抑制劑Dorsomorphin聯(lián)合共同處理不能阻斷MET對APAP暴露小鼠血ALT、AST上升的抑制效應；而AMPK激活劑A-769662也不能模擬MET對ALT、AST上升的抑制效應。③前期發(fā)現(xiàn)CAT可能是MET發(fā)揮藥理效應的新靶點，MET處理可顯著提升肝組織內(nèi)的 CAT活性，AMPK抑制劑聯(lián)合處理不能阻斷MET對CAT的激

6、活效應，而AMPK激活劑A-769662也不能模擬MET對CAT的激活效應，所以MET以不依賴AMPK的方式激活CAT。
　　結(jié)論：本研究數(shù)據(jù)表明MET對由對APAP誘導的急性中毒性肝炎具有保護作用，這一效應并非通過調(diào)節(jié)AMPK來實現(xiàn)，可能與其增強CAT活性及提升肝細胞抗氧化能力有關(guān)。結(jié)合相關(guān)文獻及本實驗室的實驗資料：氧化應激是 APAP誘導中毒性肝炎的基本機制，因而我們認為MET對APAP誘導急性中毒性肝炎的保護效應可能與其增強